凝血酶原时间（PT）检测试剂盒

凝血酶原时间（PT）检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

凝血酶原时间（PT）检测试剂是一种旨在通过组织因子替代反应物，与血浆样品混合后，加入钙离子启动凝血反应，产生凝块，通过分光光度仪检测，来测定样品中凝块形成时间的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体血浆样品凝血系统的检测，以及凝血因子和抑制剂的的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

凝血酶原时间（thromboplastin time；PT）是指血浆在组织凝血活酶（人脑、兔脑、胎盘及肺组织等制品的浸出液）和钙离子等的参与下，使凝血酶原变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，形成血浆纤维蛋白凝块（fibrin clot）所需的时间长度。其反映和检测血液系统外源性（extrinsic）或称常见（common）凝血通路或机制的生理或病理状况。外源性凝血通路或机制由凝血因子2、7、5、10、1等构成。正常凝血酶原时间通常为11至15秒。凝血酶原时间用于筛选出血倾向的病人，即外源性凝血系统异常的病人；定量检测凝血因子1、2、5、7、10、凝血酶原（prothrombin）、纤维蛋白原（fibrinogen）等差异和缺陷；检测血液病理性凝血抑制剂，例如狼疮抗凝物（lupus anticoagulant；LA）；监测华法林（Warfarin）抗凝血疗法和凝血因子替代疗法。维生素K缺乏、肝病、低（无）纤维蛋白原血症 、遗传性无纤维蛋白原血症（congenital afibrinogenemia）、凝血因子5缺陷、阻塞性黄疸、淀粉样紫癜（amyloid purpura）、肝素、狼疮抗凝物等导致凝血酶原时间延长；而口服避孕药、高凝状态和血栓性疾病等则引起凝血酶原时间缩短。其检测方法在于使用枸橼酸抗凝后的血浆和组织因子（来自于人胎盘促凝血酶原激酶（human placental thromboplastin）等，混合在一起，加热孵育后加入钙离子后启动凝血反应。

产品内容

抗凝液（Reagent A）   5毫升

反应液（Reagent B）     1管

稀释液（Reagent C）   5毫升

标准液（Reagent D）   500微升（另购）

产品说明书      1份

保存方式

保存标准液（Reagent D）在-20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（Reagent B）一旦启用，保存在-20℃冰箱里；有效保证3月 

用户自备

2毫升离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于样品反应的容器

微型台式离心机：用于样品操作

培养箱或恒温水槽：用于反应物孵育

计时器：用于反应计时

比色皿：用于样品凝血仪测定的容器

凝血仪：用于样品凝块形成分析

实验步骤

• 血浆制备

• 准备好2毫升离心管（注意：1小时内完成后续操作）
• 加入200微升抗凝液（Reagent A） 
• 抽取1.8毫升血液到含抗凝液（Reagent A）的离心管
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为3000g 
• 小心移取上层黄色液体到新的2毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）
• 即刻置于冰槽里备用（注意：2小时内使用）

• 测定准备

• 准备好上述制备的血浆样品
• 设定好凝血仪并预热
• 实验开始前，移出4毫升稀释液（Reagent C）到反应液（Reagent B）管里，混匀后，标记为反应工作液，然后移出200微升到新的1.5毫升离心管，置于37℃恒温培养箱里孵育30分钟，其余的即刻放进-20℃保存备用

• 凝血测定（手工操作）

• 准备好1个1.5毫升离心管
• 加入100微升上述制备的待测样品，混匀
• 放进37℃培养箱里孵育3分钟（注意：不宜超过5分钟）
• 即刻加入上述孵育的200微升反应工作液；同时开启计时器进行计时（注意：以秒计时）
• 倾斜离心管观察凝块形成，直至液体凝固；同时关闭计时器结束计时
• 正常参考范围：

手工操作：11至15秒

凝血仪操作：10至13秒

• 其它参数计算公式：

• 凝血酶原时间比值（prothrombin ratio；PR）：即病人的凝血酶原时间除以正常参比血浆的凝血酶原时间所得的比值

PR=（样品凝血酶原时间；秒）÷（正常对照或标准样品凝血酶原时间；秒）

参考范围：1±0.15

• 国际标准化值（International normalised ratio；INR）

INR=PR^ISI （ISI 为国际敏感指数（internationalsensitivity index，为0.97代表凝血激酶反应性）

参考范围：0.8-1.5

注意事项

• 本产品为20次操作，包括标准对照测定
• 操作时，须戴手套
• 血液采集，避免使用肝素、EDTA抗凝管
• 样品避免溶血，采血避免损伤组织
• 溶血、脂血、肠胃外喂养（parenteral feeding）样品或血浆中含有肝素、纤维蛋白（fibronogen）、狼疮抗凝物（lupus anticoagulant；LA）、水蛭素（Hirudin）等则干扰检测
• 血浆样品避免反复冻融：4℃环境维持4小时；－20℃维持2月；－80℃维持6月
• 标准液（Reagent D）为标准对照血浆
• 建议用户使用正常对照样品，建立自己的正常参考值范围
• 用户可以使用各种自动和半自动凝血仪：例如Sysmex CA 7000等进行检测，按照仪器操作手册操作
• 用户可以使用660nm波长的光度仪进行检测
• 本公司提供系列血液凝集检测试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感