EZ Trans细胞转染液

细胞转染液（核心成分为线性聚乙烯亚胺，也称作 LPEI），是新一代的转染试剂，带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团 形
成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。除了具有阳离子脂质体（如：
Lipo2000,3000）的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点。
      EZ Trans 是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络
在任何 pH 下都能充当有效的“质子海绵”体。其转染性能好于树枝状聚合物，而且它的细胞毒性低。
使用方法
1. 接种细胞：用胶原酶消化细胞并计数（不建议用胰酶）。转染前 18-24 小时进行细胞的铺板，以便在转染时，贴壁细胞的密度
      大约在 80%左右。注：培养液中的血清和抗生素不影响转染效率。
2. 准备 EZ Trans-DNA 复合物
      1）转染前将所有试剂置于室温 10 分钟。下面，以转染 24 孔板培养皿为例，说明转染的具体方法（如果在别的培养器皿中进行转染，各试剂建议使用量见表 1.：
      2）将 1 μg 质粒 DNA 稀释到 40 μL 无血清的高糖 DMEM 培养基，用移液枪吹吸 3-4 次。
      3）将 3 μL EZ Trans 转染试剂稀释到 40 μL 无血清的高糖 DMEM 培养基，用移液枪吹吸 3-4 次。
      注： 无血清的高糖 DMEM 培养基是稀释液， 不能使用含血清的培养基（ 包括 Opti-MEM） 进行 DNA 和 EZ Trans 转染试剂的稀释！因为 EZ Trans-DNA 转染复合物的形成过程不能含有血清。
      4）将稀释好的 EZ Trans 转染试剂一次性全部加入到已稀释好的质粒 DNA 中，立即用移液枪吹吸 3-4 次。
      注： 此混合的顺序不能反向进行！
      5）室温放置 10-15 分钟，以形成 EZ Trans-DNA 复合物。

表1：不同培养体积对应的待转DNA、EZ Trans、稀释液用量

3. 转染细胞
1）将上述 80 μL EZ Trans-DNA 转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋，让 EZ Trans-DNA
复合物分散均匀。
2）在 CO₂ 培养箱中 37℃下孵育细胞，转染后 12-18 小时，去除含 EZ Trans-DNA 复合物的培养液。（若细胞形态欠佳，可
在转染 3-5h 后，添加 1/2 体积的包含 30%血清的生长培养基，在转染 12-18 小时后完全去除含 EZ Trans-DNA 复合物的培养液，
用含血清和抗生素的新鲜培养液。）
3）转染后最快 7h 即可检测到转入基因的表达，可根据需要在 24-48 小时内检测转染效率。
注： 筛选稳定转染细胞株， 可在上述操作后（ 转染细胞 24 小时后） ， 将细胞传代至新鲜的生长培养基中（ 将细胞稀释 10 倍以
上） ， 在 CO₂培养箱中 37℃孵育过夜。 在有转染抗性基因相匹配的药物筛选条件下， 约 1～2 周可筛选到耐药性克隆， 在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。 

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