登革热NS1抗原检测试剂盒

登革热NS1抗原检测试剂盒（酶联免疫法）

ELISA的加样过程常见的问题和解决方法。

1. 试剂准备过程及问题解答
1）试剂盒和样本不平衡，直接打开后进行检测
2）浓缩试剂如洗涤液等未进行稀释，直接使用；
3）冻干试剂溶解不充分，解冻样本使用前不混匀；
4）标准品稀释不当，酶标试剂配制时间不当
解决办法：
1) 试剂盒使用前应整体取出，在室温下平衡30min后再进行测定；
2) 根据产品标签或说明书要求，对浓缩试剂采用适当的溶剂稀释，并按要求保存或使用；
3) 冻干试剂溶解后，要放置15min左右，使用前再次混匀；冻存样本溶解后，可轻轻振荡混匀，如有颗粒或沉淀，需离心后取上清备用。
4) 标准品如需稀释，按照说明书要求进行，稀释量至少多于加样量的20%。部分酶标试剂要求加样前现配现用，应按照要求配制，避免提前配制导致酶的失活。
问：ELISA的检测方法有哪几种？

答：ELISA的检测方法有间接法、捕获法、竞争法、双抗原夹心法和双抗体夹心法。

通用名称：登革热NS1抗原检测试剂盒
英文名称：Dengue NS1 antigen detection kit
公司品牌：美国cortez 
产品货号：8404-25
产品规格：96T
检测样本：血清
储存条件：2—8℃
检测方法：ELISA夹心法
预期用途：仅用于科研，体外检测使用
参考价格：询价
供应商家：深圳市科润达生物工程有限公司

登革热NS1抗原检测试剂盒预期用途
    登革热NS1抗原检测试剂盒用于登革热病毒的早期检测，通过酶免分析法检测人血清中的NS1抗原。它可以在IgG和IgM抗体出现之前对人血清中的登革热病毒的进行早期诊断。登革热NS1抗原检测试剂盒不能用于筛查血液或血液成分，仅用于研究。

登革热NS1抗原检测试剂盒简介
    登革热是一种急性病毒性疾病，它主要通过埃及伊蚊传播。登革热在临床上主要表现为：双相热、皮疹和造血抑制，还可表现出全身症状，如浑身不舒服、关节痛、肌肉疼痛和头痛，有时还可能出现极为罕见的出血性高烧，并可能导致致命性的休克。登革热主要流行于热带和亚热带地区，大概每年会发生100,000,000例。据统计，每年大概会出现500到1000万例登革热病人，同时还会出现250000到500000例登革热出血热。 

登革热NS1抗原检测试剂盒实验原理
    登革热NS1抗原检测试剂盒具有高灵敏度，快速和可靠性分析，采用夹心法检测血清中低含量的NS1。
质控和未知血清样品用样品稀释缓冲液稀释。微孔中包被高效的NS1抗体，封闭，样品中的NS1抗原被捕获，与二抗形成夹心。通过辣根过氧化物酶和TMB底物显色液产生的颜色反应来判断NS1抗原，用酸溶液终止反应，然后用酶标仪在450nm处读取吸收值。阴性和阳性血清测得的值作为样品中NS1抗原的诊断依据。

登革热NS1抗原检测试剂盒试剂盒组成

1. 微孔板：96孔，2-8℃下保存至有效期
2. 阴性质控：1x300µL，有助于试剂盒有效性的验证，2-8℃下保存至有效期，含有沉淀物的话使用前应离心
3. 阳性质控：1x300µL，有助于试剂盒有效性的验证，2-8℃下保存至有效期，含有沉淀物的话使用前应离心
4. 临界质控：1x300µL，检测临界值，2-8℃下保存至有效期，含有沉淀物的话使用前应离心
5. 样品稀释液：1x15ml，含有二抗，Proclin（0.02-0.03%）作为防腐剂，2-8℃下保存至有效期
6. 酶联物：1x150µL,100X，含有辣根过氧化物酶标记的多克隆抗体，使用前混匀，2-8℃下保存至有效期
7. 酶联物稀释液：1x12ml,用于100X酶连液的稀释，直接将酶联物加入此溶液即得到100X的酶连液，，配制液在2-8℃下可保存2周。未开封的稀释液2 -8℃下保存至有效期。
8. 洗涤缓冲液：120ml，10X，2-8℃下保存至有效期
9. TMB底物液：1x12ml，2-8℃下保存至有效期
10. 终止液：1x6ml，室温下保存至有效期

登革热NS1抗原检测试剂盒实验步骤
    所有试剂在使用前都应平衡至室温，混匀。
步骤：

1. 阳性、阴性和临界质控设置平行样，未知样品可不设置，90个试验样品可在一块板上进行检测。
2. 吸取50μL的样品稀释液至相应的孔内
3. 在含有样品稀释液的孔内加入50μl的未稀释血清，混匀
4. 盖板，37℃下孵育1h
5. 每孔加入300μL的1X洗涤液，全自动洗板机洗板6次
6. 用多通道移液器每孔加入100μL的酶连液，丢弃剩余的酶连液或者是保存在2-8℃下至2周
7. 盖板，37℃下孵育30min
8. 全自动洗板机洗板6次
9. 每孔加入100μL的TMB底物液
10. 黑暗处，室温下孵育20min
11. 每孔加入50μL的终止液，不盖板，室温下放置1min
12. 酶标仪450nm处读取数据

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