细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

小鼠自然杀伤T细胞 5 x 10^5 cells/T25培养瓶 原代细胞
Dextrose casein-peptone agar 葡萄糖酪蛋白琼脂    1.10860.0500MERCK默克
小鼠胚胎细胞，NIH/3T3细胞 1 x 10^6 cells/T25培养瓶 细胞系
马铃薯葡萄糖琼脂    霉菌和酵母菌的培养及计数500g
沙氏葡萄糖琼脂    酵母菌、霉菌以及其它耐酸菌培养500g
兔雪旺细胞 5 x 10^5 cells/T25培养瓶 原代细胞
TPGYT培养基基础    250(g)
7.5%氯化钠肉汤    250(g)
酪蛋白琼脂    250(g)
EC Medium    
兔腺上皮细胞 5 x 10^5 cells/T25培养瓶 原代细胞
丹酚酸B CAS 115939-25-8 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
金;纯品型;标准品;有证书 CAS 64-72-2 规格： 0.25g 订购|咨询
地肤子皂苷Ic CAS 96990-18-0 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
托品酸;纯品型;标准品;有证书 CAS 529-64-6 规格： 0.1g 订购|咨询
芫花素 CAS 437-64-9 规格： 20mg 订购|咨询
L-酪氨酸 CAS  规格： 100mg 订购|咨询
短葶山麦冬皂苷C CAS  规格： HPLC≥98%,20mg/支; 订购|咨询
莪术醇 CAS 4871-97-0 规格： 20mg 订购|咨询
茶氨酸 CAS 3081-61-6 规格： 20mg 订购|咨询
双苯酰;纯品型;标准品;有证书 CAS 957-51-7 规格： 0.1g 订购|咨询
蜕皮激素 CAS 5289-74-7 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
瓜蒌皮(双边栝楼) CAS  规格： 2.0g 订购|咨询

第一种：

是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。

第二种：

是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。

质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。

购买客户请先与我司细胞销售人员核实订购的细胞名称、种属、货号、数量、协商细胞价格并预约发货期与提取方式。向销售人员索取细胞说明书并认真阅读以方便你的实验操作。