尿素溶液(9.5mol/L)

特别提示：包括尿素溶液(9.5mol/L)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：尿素溶液(9.5mol/L)
产品货号：GL1574
产品规格：100ml

用途：
常规溶液

储存条件：室温，12个月

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名称：BCA蛋白定量试剂盒
货号：WE0276
规格：500次微孔板(50管次)
  BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物，同时将Cu2+还原成Cu+。BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物。在562 nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液，测定范围为20～2000μg/ml。

试剂盒组成：

组成	规格
BCA-A	2×50ml
BCA-B	3ml
BSA Standard Solution(2mg/ml)	2ml

保存条件：BSA Standard Solution：2～8℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品可以采用分光光度计(试管检测法)或者酶标仪(微孔检测法)测定蛋白浓度。
2、建议每次测定蛋白样品时，绘制标准曲线，以获得准确数据。
3、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水稀释)。
4、如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表1)，可采用Bradford法蛋白定量试剂盒(WE0275)或其他蛋白定量产品。

使用方法：
1、稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。

管号	稀释液用量(μl)	BSA标准品用量(μl)	BSA标准品最终浓度(μg/μl)
A	0	100	2
B	200	200	1
C	200	200(从B管中取)	0.5
D	200	200(从C管中取)	0.25
E	200	200(从D管中取)	0.125
F	200	200(从E管中取)	0.0625
G	200	0	0(空白)

2、配置BCA工作液：
1)计算BCA工作液总量：
BCA工作液总量=(BSA标准品样本个数+未知样本个数)×复孔数×每个样本BCA工作液体积
举例：BSA标准品样本个数为7个，未知样本个数2个，复孔数3个。
试管检测法：
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×2ml/每个样本工作液体积=54ml
微孔检测法：
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×200μl/每个样本工作液体积=5.4ml
2)根据计算出的BCA工作液需要总量，将BCA-A和BCA-B按照50:1的体积比，配制BCA工作液，充分混匀。
注意：
a. 由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1-2个孔。
b. 新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24小时。

3、定量检测
①试管检测法(蛋白浓度检测范围：20-2000μg/ml)
1)按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各100μl分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2)向每个试管中各加入2ml BCA工作液，充分混匀，37℃水浴中孵育30分钟 ，将各管冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。
3)用分光光度计在562 nm处，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
② 微孔检测法(蛋白浓度检测范围：20-2000μg/ml)
1)按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各25μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2)每孔加入200μl BCA工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30分钟，冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。
3)用酶标仪在540-590 nm范围内，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：
a. BCA法测定蛋白浓度时，吸光值会随着时间的延长不断加深。因此所有样品测定需在3-5分钟内完成，否则会影响蛋白定量的准确度。
b. 建议以去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。
c. 由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。
d. 未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
e. 如果得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

4、BCA蛋白定量分析结果举例：
微孔板检测法结果

蛋白浓度(μg/μl)	原始吸光值	去除背景值后的吸光值
0	0.086(背景值)	0.000
0.125	0.123	0.037
0.25	0.280	0.194
0.5	0.551	0.465
1	1.068	0.982
2	2.000	1.913

附表1. 干扰物质表
 

化合物	耐受浓度
缓冲液
乙酸盐	0.2M
甘氨酸	1M
HEPES	0.1M
MES	50mM
MOPS	50mM
Na+-柠檬酸	＜1mM
PIPES	50mM
磷酸钠	0.1M
乙酸钠	0.2M pH 5.5
TES	50mM
Tris	0.1M
盐类
硫酸铵	干扰
NaCl	1M
尿素	3M
极性化合物
DMSO	5%
甘油	10%
去垢剂和变性剂
Brij35	1%
CHAPS	1%
盐酸胍	4M
NP-40	1%
辛葡糖	1%
SDS	1%
Triton X-100	1%
糖类
葡萄糖	10mM
蔗糖	1M
螯合剂
EDTA	10mM
还原剂
β-巯基乙醇	50μM
DTT	1mM
其他
脂类	干扰
HCl/NaOH	0.1M

储存条件：2～8℃

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货号	名称	规格
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