少量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（5μg)

特别提示：包括少量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（5μg)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：少量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（5μg)
英文名称：Mini Agarose gel DNA Purification and Recovery Kit
产品货号：WH0042
产品规格：50次

本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，回收100 bp-30 kb DNA片段，回收率高达80%，每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为5μg。本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。

产品特点：
·快速：整个操作过程快速方便，十几分钟即可完成回收工作。
·多样：可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。
·高效：独特的离心柱和精心配制的缓冲液，保证最大量回收到高纯度的目的DNA。

试剂盒组成：

组分	50T
平衡液BL	30ml
溶胶液PN	25ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液EB	15ml
吸附柱CA1	50个
收集管（2ml)	50个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．平衡液BL的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。使用前请先检查平衡液BL是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
2．电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
3．如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
4．切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
5．如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测pH值，如pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30μl 3M醋酸钠（pH5.2）将pH值调到5-7之间。
6．回收<100 bp及>10 kb的DNA片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。
7．回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1．柱平衡步骤：向吸附柱CA1中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl平衡液BL，12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
2．将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。
3．向胶块中加入等倍体积溶胶液PN（如凝胶重为0.1g，其体积可视为100 μl，则加入100μl PN溶液）。50℃水浴放置10min，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置数分钟，直至胶块完全溶解（若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）。
  注意：对于回收<300 bp的小片段可在加入PN完全溶胶后再加入1/2胶块体积的异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4．将上一步所得溶液加入一个吸附柱CA1中（吸附柱放入收集管中），室温放置2 min，12000rpm（～13400×g）离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。
  注意：吸附柱容积为800 μl，若样品体积大于800 μl可分批加入。
5．向吸附柱CA1中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（～13400×g）离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。
  注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW加入后静置2-5 min再离心。
6．重复操作步骤5。
7．将离心吸附柱CA1放回收集管中，12000rpm（～13400×g）离心2 min，尽量除去漂洗液。将吸附柱置于室温放置数分钟，彻底地晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
8．将吸附柱CA1放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB，室温放置2 min。12000rpm（～13400×g)离心2 min收集DNA溶液。
  注意：洗脱体积不应少于20 μl，体积过少会影响回收的效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。DNA也可以用缓冲液（10mM Tris-Cl,pH8.0)洗脱。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，再次离心。

DNA浓度及纯度检测：
1．回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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