特别提示：包括尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG)
英文名称：Uracil DNA Glycosylase
产品货号：WH0166
产品规格：1kU|10kU

尿嘧啶DNA糖基化酶可催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。本酶可作用于含有dU的单链或双链DNA，但对寡聚核苷酸（<6个碱基）和RNA无活性。本产品来源于大肠杆菌重组克隆表达。该酶分子量约为25.7kDa。本制品浓度为2U/μl。

产品特点：
·特异性水解含尿嘧啶的长链DNA分子；
·蛋白比活性高，稳定性好。

适用范围：
1．在二代测序（NGS）应用中，主要用于mRNA定向测序文库的构建。
2．PCR反应中，PCR产物污染物的去除。

产品组成：

组分	WH0166-1	WH0166-2
Uracil DNA Glycosylase	1000U	10000U
10×UDG Reaction Buffer	450μl	3×1.5ml

储存条件：-25℃～-15℃保存。

贮存液成分：10mM Tris-HCl，50mM NaCl，0.1μM ATP，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%甘油。

单位定义：以含有尿嘧啶的DNA为底物，在1×UDG Reaction Buffer反应液中，37℃、30min内使1.8nmol的尿嘧啶释放游离时所需要的酶量定义为1个活性单位（U)。

质量控制：

性质	描述
蛋白纯度	＞99%
酶活性	77,000 U/mg
单链核酸外切酶活性	100 U酶中，＜5.0%
双链核酸外切酶活性	100 U酶中，＜1.0%
双链核酸内切酶活性	100 U酶中，未检出
宿主基因组污染	100 U酶中，＜10拷贝

使用方法：
1．在NGS文库构建过程中，一般按终浓度0.01U/μl的量加入UDG酶。也可根据实验具体情况来调整用量。
反应条件：50℃，10 min。
灭活条件：95℃，2 min。
2．在PCR反应中的建议体系如下：

成分	用量
模板DNA	<200ng
引物Mix	200~500nM，each
10×PCR Buffer	2μl
dN（U)TP	0.2mM
UDG酶（2U/μl)	0.1 μl
Taq酶（5 U/μl)	0.2μl
ddH2O	To 20 μl

反应条件：50℃，2~10 min。后接PCR反应程序。

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名称：Tth DNA聚合酶
货号：BTN90501
规格：250U
本酶来源于嗜热菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二价阳离子存在的情况下，具有DNA多聚酶活性。它与Taq酶一样被广泛用于PCR反应，但耐热性比Taq酶高，因此对高GC含量模板的PCR 也有较好的效果。本酶基本上没有3′→5′外切酶活性及5′→3′外切酶活性，所以也可用于双脱氧法测序。另外，本酶具有RTase活性，在Mn2+存在的情况下，RTase活性会得到强化。利用该特性，可以用来在同一管中进行逆转录反应和PCR反应，即一步法RT PCR。(但是，在Mn2+存在时，RT-PCR的准确性不高)此外，本酶与Taq DNA多聚酶一样，PCR产物可通过T载体进行TA克隆。

产品特点：
1．RT-PCR反应的特异性增加：在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性。
2．二级结构减少：在较高的温度下进行逆转录，减少了由于RNA二级结构引起的问题。

产品组成：

成分	规格
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	50μl
10×Tth Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
以λDNA为模板，以10×Tth Buffer(+MgCl2)作为缓冲液进行体积为50μL的PCR扩增反应为例

1．按下列组份配制PCR反应液。

成分	终浓度	用量
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	1.25U	0.25μl
10×Tth Buffer(+MgCl2)	1×	5μl
dNTP Mixture(各2.5mM)	各0.2mM	4μl
模板DNA	50pg～1μg	详见下表
引物1(10μM)	0.1～1μM	最多到1μL
引物2(10μM)	0.1～1μM	最多到1μL
灭菌蒸馏水		加到50μL

推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量：

哺乳动物基因组DNA	0.5～1μg
酵母基因组DNA	5～500ng
细菌基因组DNA	0.5～50ng
质粒DNA	5～500pg
PCR回收片段	1～100pg

2．PCR反应条件
以λDNA为模板，扩增1kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：

注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
1．循环测序：该酶为耐热性酶，可通过与PCR 同样的温度条件进行测序反应。由于其高温稳定性好，对于复杂高级结构的模板效果较好。
2．引物：用于耐热性酶测序的引物需比用于非耐酶测序的引物设定更长的时间。采用较短的引物时，可能会出现不能获得条带变淡的情况。

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