特别提示:包括超敏化学发光底物(A液+B液)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:超敏化学发光底物(A液+B液)
产品货号:ZN1944
产品规格:1盒
产品保存:4℃密封避光保存,一年有效
产品说明:Western blot 底物发光检测试剂是一种高灵敏度的增强型化学发光底物试剂,采用独特的发光底物系统,并对成份进行了优化。产品背景低,稳定性好,信号的灵敏度及强度高,发光时间持久。比普通 ECL 试剂敏感度高数十倍。用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP的抗体及其关联的抗原。可以灵敏地检测出目的蛋白的存在。它由辣根过氧化物酶(HRP)催化发生化学反应,发出荧光,可对×光胶片曝光,也可直接进行 lμminometer 检测或者荧光 CCD 扫描。
产品特点:
1.高信噪比,背景低。
2.发光迅速。
3.可在日光灯下进行发光操作。
4.灵敏度高:可检测 femto 级抗原。
5.发光持续时间长,可进行反复曝光,进行结果优化,而不需重复 Western blot。
6.节约抗体,包括一抗二抗。超敏化学发光检测试剂因灵敏度高,可使用较高抗体稀释比例。一抗稀释 1:1000-1:5000或0.2-1.0μg/ml ;二抗稀释 1:20000-1:100000或10-50ng/ μl。
使用方法:
1.执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。
2.膜的封闭:用 TBS-T 液洗涤印迹膜 10minX2。放入 5%脱脂奶粉封闭液内,摇床震动,室温封闭1小时。
3.一抗孵育:去除封闭液,并加入稀释好的一抗,用摇床震动,室温孵育2h或4℃孵育过夜。
注意:最好使用推荐的一抗稀释比例,稀释一抗使用封闭液稀释。
4.用 4-6倍 TBS-T洗涤印迹膜,10minX3。增加洗液量,和/或洗膜的次数可降低背景。
注意:洗涤之前,用 TBS-T洗液将印迹膜进行简单的漂洗,将会增加洗膜的效果。
5.二抗孵育:将一抗孵育后的印迹膜放入适当稀释的HRP 标记的二抗中孵育,摇床震动,室温孵育2 小时。
注意:最好使用推荐的HRP 标记二抗的稀释比例,稀释二抗使用封闭液稀释。
6.重复第 4 步,以去除非特异性 HRP 标记二抗的结合。
注意:与 HRP 标记二抗孵育后,必须彻底地清洗印迹膜。
7.制备工作液:按每 1 ml 蒸馏水加 A 液和 B 液各 50μι,混匀组成作液即可使用。用量以充分覆盖印迹膜为基准。每10cm2膜需要大约1ml工作液。
8.将印迹膜有蛋白的一面朝上平整的铺在一张平板上,加上配好的发光底物工作液。
9.将印迹膜与工作液孵育1-5min。
注意:孵育的时间可以在暗室里观察,以判断是否进行胶片曝光。
10.将一洁净的保鲜膜或透明的玻璃纸平整的铺在孵育有工作液的印迹膜上,只要保鲜膜或透明的玻璃纸比较大可以不用吸除多余的工作液,轻轻赶出其间的气泡。
11.在暗室中取一张×胶片小心置于膜上,曝光 5 秒至 1分钟,立即显影定影。
注意:根据其发光的强度,缩短或延长×片的曝光时间(对微弱信号,曝光时间可延长至数小时),或者曝光一系列不同的时间后再显影定影挑选一张满意的。也可用合适的照相器材直接记录蛋白膜的化学发光图像。工
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名称:抗荧光淬灭封片液(强)
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本品是一种用于减缓荧光淬灭的封片试剂。可以用于减缓各种常见荧光染料的荧光淬灭。本抗荧光淬灭封片液在使用前需把抗荧光淬灭试剂加入到抗荧光淬灭试剂溶剂中,充分溶解并混匀后即可使用。配制好的抗荧光淬灭封片液可-20℃避光保存至少3个月。操作简单,在封片时用移液器滴一滴配制好的抗荧光淬灭封片液在样品上,盖上盖玻片即可完成操作。按照每个样品封片需要50微升计算,足够用于100个样品的封片。
注意事项:
1. 荧光物质均易发生淬灭,染色后的样品宜避光保存。
2. 在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭,但仍宜尽量避光。
3. 需把抗荧光淬灭试剂一次性全部加入到抗荧光淬灭试剂溶剂中,充分溶解并混匀后方可使用。
名称:AMCA抗兔免疫荧光染色试剂盒
货号:YT103
规格:>300次
本试剂盒含有AMCA标记的山羊抗兔IgG(H+L)抗体,可以用于检测兔来源的相应一抗,观察到的颜色为非常鲜艳的蓝色。AMCA(7-Amino-4-methylcoumarin-3-acetic acid-NHS ester)是一种常用的非常明亮的蓝色荧光探针。AMCA的吸收峰350nm、发射峰450nm。本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液,可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达6个月,并且在6个月内至少可以重复使用10次。本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液,可以使荧光更加持久。本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片,至少可以检测300个样品。
试剂盒组份:
抗兔AMCA————————————60μl
免疫荧光染色二抗稀释液—————50ml
抗荧光淬灭封片液————————15ml
注意事项:
1. 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2. 在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭,但仍宜尽量避光,特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。
3. 荧光物质均易发生淬灭,染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存,但存放时间通常不宜超过一周,随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。
4. 免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。
5. 如果观察时发现荧光过弱,可以适当提高一抗的浓度;如果荧光还是比较弱,可以适当提高荧光标记抗体的浓度。
储存条件:-20℃,有效期一年。