特别提示：包括RNase抑制剂(鼠源)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：RNase抑制剂(鼠源)
英文名称：Murine RNase inhibitor(40U/μl)
产品货号：SY0266
产品规格：2KU|10KU|20KU|100KU

RNase抑制剂（RNase inhibitor）是人的胎盘中存在的一种特异性核糖核酸酶(RNase)抑制剂，能够特异地与RNase以非共价键结合形成复合体从而使RNase失活。该产品是以可溶形式在大肠杆菌中表达纯化的重组鼠源RNase抑制剂，能够广泛抑制各种RNase (RNase A, B, C)，此外经过RT-PCR、RT-qPCR检验，本品能与Reverse Transcriptase、M-MLV (H-) Reverse Transcriptase以及各种DNA Polymerase兼容。与人源RNase inhibitor相比，本品不含人源蛋白中的两个对氧化非常敏感的半胱氨酸，因而具有更高的抗氧化活性，且更加适合于对高DTT敏感性实验 (如qPCR)。

该产品可用于cDNA第一链合成、多核糖体的分离(Polysome isolation)、体外转录和体外无细胞翻译系统。

活性定义：抑制5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定义为1个活性单位 (U)。RNase A 的活性通过水解Cyclic 2, 3-CMP 生成3-CMP定量求得。

质量控制：
核酸外切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg λ-Hind III在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA残留检测：50 μl体系中，加入200 U本品，以ddH2O为模板，扩增E. coli 16 s rDNA基因。35个循环后进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

储存条件：-20℃，有效期2年。

应用实例

1.在RNase free离心管中配制如下混合液：

RNase free ddH2O	to 20μl
5×Buffer	4μl
Oligo (dT)18 (50 μM)	1μl
dNTP Mix (10 mM each)	1μl
RNase Inhibitor (40 U/μl)	1μl
Reverse Transcriptase (200 U/μl)	1μl
模板RNA	10 pg-2.5 μg

2.轻轻混匀。
3.50℃ 45min, 70℃ 15 min。
4.产物于-20℃保存。

注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）抑制RNase活性的pH值范围较广，在 pH 7～8时表现最大活性。
3）起泡或剧烈搅拌 (Vortex等)会引起失活。
4）不抑制RNase H活性。

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名称：一站式miRNA柱式提取试剂盒
货号：BTN80104
规格：50次
本试剂盒是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。

试剂盒特点：
1.一步法直接分离纯化小RNA，比两步法(先分离总RNA和再纯化其中的小RNA)和PAGE电泳回收法更简单。得到的小RNA长度大部分在200nt以下，包括5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。
2. 柱式操作，比miRNA提取试剂盒更加简单快捷，整个过程只需要十多分钟。
3.适用范围广，可以用于动物组织、血液及部分植物组织等实验材料。
4.小RNA 纯净，OD260/280一般都在1.9以上。
5.产率一般为20-40μg/100mg动物组织。
6. 无基因组DNA的污染。
7.可用于RT-PCR、miRNA 标记、microarray等后续实验。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	100套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理100mg左右的各种组织，可以在1.5mL塑料离心管中。如果处理样品量大，请分成很多相当于微量提取的量进行，最后再收集在一起。

1. 新鲜配制裂解液。将溶液A和溶液B按1:1的比例混合，然后根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用。注意：溶液A和溶液B混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1mL新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL 新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜的动物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/mL裂解液，否则十分容易产生DNA污染。
d)对新鲜的植物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
e)对 RNAhold 保存动物或植物组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg组织加1mL新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备氯fǎng(1mL裂解物需0.2mL 氯fǎng)，振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000～15000g室温离心3～5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL)转移到一根离心吸附柱中以去除大RNA(最好标记以跟后面要用的专门吸附小RNA的另一离心吸附柱区别开来，本试剂盒提供的离心吸附柱之间没任何区别，可以随机选一个做大RNA 吸附，另一个做小RNA 吸附)。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 12000～15000g室温离心半分钟，收集管中的穿透液。大RNA 及DNA将与离心吸附柱的膜结合，小RNA 将存在于穿透液中。但由于离心吸附柱的最大吸附能力为40μg动物RNA，20μg植物RNA，如果样品中的大RNA含量高于上面数值，则穿透液中将同时含有大RNA和小RNA，在此情况下，穿透液需要再次重复上柱以去除大RNA。由于此时离心吸附柱已经吸附了大RNA，所以需要预处理(具体步骤见本手册最后的附录)。
6.在最后得到的不含大RNA的穿透液中加等体积的溶液C，混匀。此时溶液的总体积约1.5mL。
7. 先转移约0.75mL 到一新的离心吸附柱中。注意：不要使用已经使用过的、用来吸附大RNA的离心吸附柱。12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
8. 将上步上柱剩余的样品转移到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
9. 加 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加 0.3mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。此步一般可以省略。
11. 12000～15000g室温离心半分钟以甩出残联液体。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响miRNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μLRNA 洗脱液。
13. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为miRNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

附录：
1. 将结合有大RNA和DNA的离心吸附柱中加入0.1mL自备的超纯水,12000～15000g室温离心半分钟，弃收集液。
2. 再加 0.1mL自备的超纯水，重复上步一次。
3. 将第5 步的得到、需要进一步去除其中大RNA和DNA污染的穿透液直接上柱，12000～15000g室温离心半分钟，收集穿透液(此穿透液含小RNA)。
4. 如果大 RNA 已经去干净，可以直接进入第6 步；如果大RNA 没有去除干净，则用本附录1-2的方法处理离心吸附柱，然后再将此穿透液加入(接本附录第3 步)。一般样品只需要额外处理一次就可以去除全部的大RNA污染。

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货号	名称	规格
BTN101109	粪便RNA柱式提取试剂盒	50次
BTN130699	RNase抑制剂(小鼠源)(40U/μL)	3000U
BTN3110	氧钒核糖核苷复合物(RVC/VRC)	10mL
BTN90318	柱式DNA清除剂	50次
BTN60604	DEPC处理水	250mL
BTN71207	RNA洗脱液	10mL
YT527	总RNA抽提试剂(Trizol法)	100ml