特别提示：包括T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)
英文名称：T4 Polynueleotide Kinase
产品货号：JN0067
产品规格：200U×5

  该酶能够催化磷酸在γ-位和双链/单链DNA或RNA的5′-羟基末端以 及3′-单磷酸核苷间进行转移和交换：5′-OH + NTP 5′-P + NDP;
  该酶还具有3′磷酸酶活性，将3′-磷酸基团从寡核苷酸的3′磷酸 末端、脱氧3′-单磷酸核苷和脱氧3′-二磷酸核苷上水解掉。

产品组成：

组份	体积
T4 PNK（10U/μl）	20μl
10×T4 PNK Reaction Buffer	1ml
10mM ATP	50μl

产品用途：
1、引物或PCR产物的5′末端磷酸化以便进行连接反应。（参见实验方案）
2、合成DNA接头 (Linker) 的5′末端磷酸化以便进行连接反应。
3、DNA及RNA 5′末端的标记，用作寡核苷酸探针。

使用建议：
1、1×T4 PNK反应缓冲液中不含ATP，需在反应体系中加入终浓度为1mM的ATP，也可以使用T4 DNA连接酶的反应液代替。
2、铵离子强烈抑制T4 PNK活性，故DNA应溶于不含铵盐的溶液中。

活性定义：以Micr℃℃cal Nuclease处理的小牛胸腺DNA为底物，在37℃，pH7.6的条件下，30分钟内使1 nmol 的[γ-32P]ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

根据您的关注的T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)，您可能还对以下产品有需求：
 

货号	名称	规格
BTN60309	RNase A溶液(2mg/mL)	1.5mL
SV0193	BsmBI限制性内切酶	1KU|200U
SV0260	BstNI限制性内切酶	15KU|3KU|1500U
SV0282	BtsCI限制性内切酶	10KU|2KU
SV0300	DdeI限制性内切酶	5KU|1KU|500U
SV0368	FauI限制性内切酶	1KU|200U
SV0422	HpaII限制性内切酶	10KU|10KU|2KU|1KU

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名称：热敏磷酸酶
货号：BTN130655
规格：500U
本产品是从南极微生物中克隆并在大肠杆菌中表达的热敏磷酸酶，它能催化除去DNA或RNA末端的5´磷酸基团。由于磷酸酶处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5´磷酸末端，因此它们不能进行自连接。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。

产品特点：
1．除去DNA、RNA、rNTPs和dNTPs 5´末端的磷酸基团
2．防止克隆载体的自连接
3．蛋白质丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的去磷酸化
4．为5´末端标记准备模板
5．去除PCR产物中的dNTP和焦磷酸盐
6．65℃加热5分钟可使酶完全失活

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在37℃条件下，30分钟能使1μg经HindIII(产生5´突出末端)、EcoRV(产生平齐末端)或PstI(产生5´凹陷末端)消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量。

名称：M-MLV反转录酶II(RNase H-)(逆转录酶)
货号：YT394
规格：2000U|10KU|50KU
本品是一种经过改造和优化的M-MLV反转录酶，具有正常的依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性，能够以RNA或DNA为模板，在引物存在的情况下进行互补DNA链的合成，即可以进行cDNA(complementary DNA)的第一链合成。

本产品是最常用的反转录酶之一，广泛用于获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成，后续可以用于PCR、real-time PCR也称定量PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建等。本品还可以通过反转录用于DNA探针的荧光、生物素、地高辛或同位素标记等，也可以通过引物延伸(primer extention)来分析和研究RNA。

本产品无RNase H活性，反转录效率高、产物长度长。本产品与野生型M-MLV反转录酶相比，无RNase H活性，不能选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，从而有助于高效合成长度更长的cDNA。本产品经测试可以轻松完成长度为8 kb及以下基因的反转录(参考图1)，反转录的最大长度可以超过10kb。


使用本品反转录总RNA后，对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见对于0.2-8kb的cDNA可以非常高效地被反转录。

本产品热稳定性高。最适反应温度为42-45℃，但当温度达到50℃时仍具有很高活性，且可获得较高产量的cDNA。


在不同温度下的反转录效果。用从NIH3T3细胞抽提获得的总RNA 500 ng，在20μl的反转录体系中按照图中所示温度进行反转录。反转录完成后取1μl反转录产品进行目的基因的PCR扩增和电泳。

本品是一种大肠杆菌重组高表达的的反转录酶，由于其表达量非常高，大大提高了本产品的性价比。本反转录酶含有从Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase基因克隆的缺失RNase H domain的pol基因，并进行了突变优化以提高其热稳定性、反转录效率和表达量。

酶活性定义：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTTP into acid-precipitable material in 10 min at 37℃ using poly(A)·oligo(dT) 12-18 as template-primer。反应体系为 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 10 mM DTT, 0.5mM [3H]-dTTP and 0.4 mM polyA·oligo(dT)12-18。

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。

酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.01% NP-40 and 50% glycerol。

失活或抑制：80℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对M-MLV反转录酶(RNase H-)有抑制作用。

本产品中M-MLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200U/μl，用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。

储存条件：-20℃。