miRNA荧光定量PCR检测试剂盒

特别提示：包括miRNA荧光定量PCR检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：miRNA荧光定量PCR检测试剂盒
英文名称：miRNA fluorescent quantitative PCR detection kit
产品货号：ALH190
产品规格：50μl×50次

本试剂盒采用SYBR Green I 嵌合荧光法的原理进行miRNA 荧光定量检测。本试剂盒包含miRNA 荧光定量检测的所有试剂，包括2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。2×miRNA qPCR Mix（含Sybr Green）是专门为miRNA 定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR 检测试剂，其中的DNA polymerase 采用的是抗体修饰的热启动形式， 配合特殊的Buffer 体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。（该试剂盒须与miRNA对应cDNA第一链合成试剂盒（ALH189）配套使用。）

试剂盒组分(25次)：
2 x miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)———————1.25 ml
Reverse primer(10μM)——————————————55μl

需自备的试剂：
1. 分子生物学实验级别的水（无核酸酶）
2. 待检测miRNA对应的qPCR上游引物（Forward primer）

Forward Primer设计原则：
1. 遵循引物设计的最普遍原则。
2. 以成熟的miRNA 序列为基础，将U替换成T，这是最基础和最简单的设计方法。
3. 试剂盒中提供的下游引物的Tm 值为65℃，设计上游引物的Tm 值要尽量保证在65℃左右。
4. 若按照原则2 的方式直接设计的引物其Tm 值过低，可以在引物的5’端添加几个碱基（最好为G或C碱基）；也可以在’3端添加1 个或几个A 碱基；或者5’端和3’端同时修饰。
5. 若按照原则2 的方式直接设计的引物其Tm 值过高，可以在引物的5’或3’端去掉几个碱基。

注意事项：
1. miRNA 第一链cDNA 的加入量不要超过real time PCR 体积1/10。
2. 对于特殊的检测体系中，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA 的丰度适当的稀释cDNA（10倍或者100倍）。
3. 本品中含有荧光染料Sybr Green，I保存本品或配制PCR 反应液时应避免强光照射。
4. 2×miRNA qPCR Mix不含参比染料ROX，客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。

储存条件：-20℃，有效期6个月。

本制品别名：microRNA荧光定量PCR试剂盒|microRNA荧光qPCR试剂盒|miRNA荧光定量检测试剂盒

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名称：taq酶抗体
货号：BTN130815
规格：500U
Taq Antibody是Hot Start PCR用抗Taq抗体，其与Taq酶结合后抑制DNA聚合酶活性。使用本制品进行PCR扩增时，高温变性前抗Taq抗体与Taq酶结合抑制DNA聚合酶活性，能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性，DNA聚合酶活性恢复，达到Hot Start PCR效果。使用本制品无需特殊的抗Taq抗体失活处理，可以在常规PCR反应条件下使用。其工作原理如下：


储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。

活性定义：Taq Antibody与Taq DNA Polymerase混合，25℃，10 min温浴后，在55℃，10 min条件下抑制90％以上的1U的Taq DNA Polymerase活性的Taq Antibody量定义为1U。

纯度：
1. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA-Hind III在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 10 U的Taq Antibody和1μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
4. 10 U的Taq Antibody和1μg的16S，23S rRNA在37℃或70℃下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。
5. 35Cycles的PCR反应条件下，无Mouse Genomic DNA的污染。

名称：PCR Master Mix (含蓝色电泳染料)
货号：YT382
规格：400次|2000次|10000次
本品是含有蓝色染料(电泳位置约300-500bp)的2倍浓度的PCR预混液，含有2X Taq DNA Polymerase、2X PCR Buffer、2X dNTP和2X Loading Buffer，只需加入模板DNA、引物和水即可进行PCR扩增，并且扩增完毕后可以直接上样电泳。主要适用于cDNA或基因组DNA等的常规PCR扩增，特别适合于定性或半定量的PCR扩增，也可用于长度小于2kb的DNA片段的扩增和克隆。

本品中已经含有所有的通用组分，用户只需自备引物、模板DNA和水即可进行PCR扩增。大大简化了PCR操作，使操作更加快捷，也减少了PCR操作过程中可能导致的污染，使PCR的重复性更好。可以扩增出长达8kb的片段，但通常更适合用于扩增2kb以下的DNA片段。

本产品中加入了蓝色的电泳示踪染料，其在浓度为1%琼脂糖胶中的迁移位置大约位于300bp和500bp之间。PCR结束后可直接进行电泳检测，无需再添加上样缓冲液。蓝色示踪染料不会影响对相应DNA条带的观察和检测。

本产品稳定性高，经测试，反复冻融15次后对PCR的扩增效果无显著影响。反复冻融15次前后，使用不同引物扩增100-1500bp间不同长度目的片段的效果如下图所示。


本产品反复冻融15次前后扩增不同长度产物的效果图。A. 反复冻融前本产品进行PCR的扩增结果。B.反复冻融15次后的本产品进行PCR的扩增结果。除本产品是否反复冻融15次外，A和B的反应体系完全相同，电泳的上样量也相同。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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货号	名称	规格
BTN130307	25mM氯化锰溶液(PCR级MnCl2溶液)	5mL
SY0037	即用型PCR预混溶液	1ml
SY0044	脱氧鸟苷三磷酸溶液(100 mM)(dGTP)	400μL
SY0051	矿物油	100ml
JN0023	热启动Taq DNA聚合酶	250U
JN0025	UltraTaq DNA聚合酶	250U