槐花染料法PCR鉴定试剂盒注意事项:
建议加样顺序是阴性质控品、待检样本、阳性质控品。4. PCR扩增(扩增区)
1) 仪器设置(以ABI Prism 7500为例)
将PCR反应管放入PCR仪内,按照对应顺序设置阴性质控品(NTC)、阳性质控品(Standard)及待检样本(Unknown)。Reporter Dye为FAM,Quencher Dye为None,参比染料(Passive Reference)为 None。
2 ) 扩增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集荧光信号,反应体系为25 μl。
自备物品:
15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件
14℃或-20℃
特点:
1.产品仅用于科研即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速
2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp
3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳
4. 提供阳性对照,便于分析试验结果
【结果分析条件设定】
u 基线(Baseline)设定:应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域(所有样本荧光信号无较大波动),起始点(Start)应避开荧光采集起始阶段的信号波动,终止点(End)应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环,建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定:将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
【质控标准】
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性,无指数扩增期,Ct=40或无Ct;
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性,有明显的指数扩增期,Ct值应小于等于35;
3. 以上要求需在一次实验中同时满足,否则该次实验视为无效。
【结果判断】
1. 阳性:有明显的指数扩增期,且Ct<38;
2.可疑:有明显的指数扩增期,且38≤Ct<40,此时样本为可疑样本;对于可疑样本建议复核一次,若复核结果Ct<40且有指数扩增期,则判定为阳性,否则判定为阴性;
3. 阴性:无指数扩增期,Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
【对检验结果的解释】
1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果;
2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,可能会导致出现假阴性结果。
T淋巴细胞亚群CD8+ CD8+ 2.5 80 ng/mL 0.1
二氢辣椒素 Dihydrocapsaicin 3.125 100 ppb 0.1
辣椒素 Capsaicin 62.5 2000 ppm 10
四氢叶酸 Tetrahydrofolic Acid 6.25 200 ng/mL 1
亚甲基四氢叶酸还原酶抗体 MTHFR Antibody 25 800 ng/mL 1
结核病抗体 tuberculosis antibody 5 160 ng/mL 1
胸腺活化调节趋化因子 thymus activation regulated chemokine 7.5 240 pg/mL 1
中性内肽酶;脑啡肽酶 Neprilysin 6.25 200 U/L 1
血管紧张素Ⅱ angiotensionⅡ 5 160 pg/mL 1
醛固酮 Aldosterone 12.5 400 pg/mL 1
环磷酸鸟苷 Cyclic guanosine monophosphate 1 32 nmol/L 0.1
肾素 Renin 15 480 pg/mL 1
糖缺失性转铁蛋白 carbohydrate deficient transferrin 3.75 120 mg/L 0.1
c-myc癌基因产物 c-myc 12.5 400 ng/L 1
抗氧化酶 antioxidant enzyme 12.5 400 U/mL 1
血小板第四因子 Platelet Factor 4 0.625 20 ng/ml 0.1
抗心磷脂抗体 anti-cardiolipin antibody 3.125 100 U/mL 0.1
分子式:C7H17NO7S分子量:259.28
3-(N-三(羟甲基)甲氨基)-2-羟基丙磺酸
哌嗪-N,N-双(2-羟基丙烷磺酸)二钠盐 108321-07-9
POPSO disodium salt分子式:C10H20N2O8S2NA2分子量:406.40
哌嗪-N,N'-二(2-羟基丙磺酸)二钠盐
1,4-哌嗪二乙磺酸二钾盐 108321-27-3
槐花染料法PCR鉴定试剂盒PIPES dipotassium salt分子式:C8H16N2O6S2K2分子量:378.55
哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)二钾盐
1,4-哌嗪二乙磺酸二钾盐 108321-27-3
哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)二钾盐
PIPES dipotassium salt分子式:C8H16N2O6S2K2分子量:378.55
1,4-哌嗪二乙磺酸二钠盐 76836-02-7
PIPES disodium salt分子式:C8H16N2O6S2NA2分子量:346.33
PIPES-2Na询价
3-(N-吗啡啉)丙磺酸钠 71119-22-7
MOPS sodium salt分子式:C7H14NO4SNA分子量:231.25
3-(N-吗啉)丙磺酸钠
技术特点:
1准确可靠,临床双盲对照试验>1000例,结果与金标准测序法比对,结果一致性大于99%。
2高灵敏:可检测低至10ng的人基因组DNA。
3快速:整个检测流程只需3小时。
4简便:试剂盒提供预混好的试剂,使体系配置操作简便。
5防污染
6高特异性:双重特异性组成,保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对,才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对,在延伸中产生荧光。