Goldenstar™ RT6 cDNA Synthesis Kit--性能参数，报价/价格，图片

基本信息

产品名称：

Goldenstar™ RT6 cDNA Synthesis Kit

英文名称：

Goldenstar™ RT6 cDNA Synthesis Kit

国产/进口：

国产

产地/品牌：

TSINGKE

型号：

TSK301M

参考报价：

1500元/100次

销售商：

北京擎科生物科技有限公司

总点击数：

1975

更新日期：

2024-03-28

产品类别：

分子生物学试剂

性能参数

Goldenstar™ RT6 cDNA Synthesis Kit
50℃反应，获得15kbcDNA，用于qPCR仅需15 min

【产品简介】
专为两步法RT-PCR第一步cDNA第一链合成研制的试剂盒，包含RNA到cDNA合成所需的所有试剂。可用于后续PCR、杂交、cDNA文库构建、全长cDNA合成等。
Goldenstar^TMRT6由改造的莫洛尼鼠白血病逆转录酶（M-MLV RTase）经体外大肠杆菌重组表达而来。Goldenstar^TM RT6通过删除RNase H活性，有效减少模板RNA 的降解，使其聚合酶活性及持续性大大增强；并通过随机突变筛选出热稳定性强的突变体，使其反应温度提高到50℃，有利于复杂结构RNA结构的逆转录进行。

【产品特点】
RNaseH活性缺失：产量高、产物长
热稳定性强：适合困难模板、二级结构复杂、高GC的RNA模板
良好的进行性：可获得长片段cDNA
引物选择灵活：Goldenstar^TM Oligo(dT)₁₇、Goldenstar^TM Randomer、GST

【产品组成及保存】
-25~-15℃保存，有效期一年。

组分	规格
	TSK301S(30 次 )	TSK301M(100 次 )
Goldenstar^TM RT6 (200U/µL)	30 µL	100 µL
5×Goldenstar^TM Buffer	150 µL	500 µL
DTT(0.2 M)	40 µL	120 µL
dNTP Mix(10 mM)	40 µL	120 µL
Goldenstar^TM Oligo(dT)17(50 μM)	40 µL	120 µL
Goldenstar^TM Randomer(50 μM)	40 µL	120 µL
RNase-free Water	1 mL	1 mL

【注意事项】

1. 实验操作过程中要注意可能引入RNase污染，操作过程尽量在封闭独立区域，远离质粒提取实验台，使用单独的移液器并佩戴口罩和一次性未开封手套。

2. 所有试剂应在推荐温度下保存，使用时可提前把Goldenstar^TMRT6之外的其他试剂置于冰上充分融化，颠倒混匀后使用。

3. 本试剂盒提供的Goldenstar^TM Randomer和Goldenstar^TM Oligo(dT)₁₇是针对本试剂盒专门优化的引物。优化后的Goldenstar^TMRandomer可较好应用于qPCR实验；当进行多个长片段mRNA的逆转录时，使用Goldenstar^TMOligo(dT)₁₇能获得更好地结果，当进行单个长片段的mRNA逆转录时，推荐使用特异性引物，同时用Goldenstar^TM Oligo(dT)₁₇作为补偿方案，以防止特异性引物设计时的缺陷。

【操作流程】
1. 在无核酸酶的微量离心管中按如下表格配置逆转录反应体系，轻轻混匀后瞬时离心；

组分	使用量
5×Goldensta^TMBuffer	4 µL
dNTP Mix	1 µL
Goldenstar^TMOligo(dT)₁₇ or Randomer^*	1 µL
DTT	1 µL
Goldenstar^TMRT6	1 µL
RNA Template^**	**
RNase-free water	Up to 20 µL
组分	使用量

*产物用于cDNA全长扩增，则使用Oligo(dT)₁₇；产物用于qPCR，则使用Randomer。

**总RNA 10 ng~5µg；mRNA 0.5 ng~0.5µg。
2. 反转录程序
如果用Goldenstar^TM Oligo(dT)₁₇或GSP：50℃ 30-50 min，85℃ 5 min
如果用Goldenstar^TMRandomer：25℃ 10 min，50℃ 30~50 min或15 min（产物用于qPCR），85℃ 5 min
如果要获得更高的反转录效率，逆转录温度可提高至55℃，也可优化反应过程，详见说明书。

【问题讨论】
Q1：一步法or两步法逆转录？如何选择？
A1：根据自身实验需求进行选择，擎科生物Goldenstar™ RT6系列逆转录试剂盒，用于两步法RT-PCR第一步cDNA第一链合成。

逆转录方法	优势	劣势
一步法	1. 消除了样品转移步骤，不仅消除了控制物污染的潜在来源，且需较少的准备和操作时间 2. 使用的引物是基因特异性引物，灵敏度高，常用于分析低表达水平基因。	1. 同一样本中只有有限数量的目的基因被扩增，且需在转录和扩增间寻找一个平衡； 2. 逆转录与扩增同时进行，易产生交叉影响； 3. 模板不易保存，每次实验需重新提取RNA。
两步法	1. 可将大批量RNA转化为cDNA，然后储存后用于后续实验，检测大量基因； 2. 可使oligo(dT)或随机引物合成第一链cDNA，逆转出所有mRNA信息； 3. 在优化RT和PCR步骤后，可更好地控制实验过程； 4. 只有少量的转录本用于PCR，则从RNA分离到RT反应的抑制剂（乙醇、酚及胍盐等）被稀释降低抑制	1. 更耗费时间，且带来污染的可能性更高； 2. RT过程及条件需以相同效率逆转录RNA，否则会影响qPCR的启动效率，带来不同的实验结果。

Q2：可以通过测逆转产物cDNA浓度判定逆转效率吗？
A2：不可以。逆转录产物cDNA是混合物，除了cDNA产物以外，还有buffer、逆转录酶、引物，同时还包含未转录的模板RNA，总RNA中的tRNA、rRNA等，都会干扰浓度测定结果，因此不能反应真实的cDNA产量。

Q3：用Goldenstar^TM Randomer引物逆转录时，反应程序25℃ 10 min的作用是什么？
A3：为了结合更多的模板RNA。

【实例分享】
1. Goldenstar^TM RT6 cDNA Synthesis Kit卓越的反转录效率
实验目的：扩增小鼠HDAC6基因CDS区上三段不同大小的目标序列，1.5 kb，2.5 kb，4.8 kb。
实验设计：分别以国内A公司、进口B公司及擎科RT6逆转录试剂盒反转后的cDNA为模板，用本公司金牌Mix（cat.TSE101）及三对引物分别扩增。
扩增电泳检测结果如下：

2.使用Goldenstar^TM RT6 cDNA Synthesis Kit逆转录小鼠RNA得到cDNA，稀释。针对小鼠MOCT4基因设计Real-time Quantification PCR引物，使用本公司2×T5 Fast qPCR Mix（SYBR Green I）试剂盒（cat.TSE202）和其他两家公司对比进行qPCR反应。

公司简介

北京擎科生物科技股份有限公司（Beijing Tsingke Biotech Co., Ltd.）是一家自主全产业链的基因合成平台型企业，业务范围涵盖合成基因组学产品及服务、生命科学原料及设备、生物制造CXO三大方向。

企业总部位于北京，运营实体和实验室遍布全国，总运营面积超70,000 m²。致力于为全球从事生命科学研究的科研人员及企事业单位提供高质量的生物技术服务和产品，业务覆盖全国并延伸至美洲、欧洲等海外地区，拥有快速响应客户需求的能力，为全球近20万用户提供服务与产品。

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