甲基绿-派络宁染色液

产品简介：

甲基绿-派络宁染色液(Methyl Green-Pyronin Stain,MGP)甲基绿-派洛宁染色液是一种把细胞核染成绿色或蓝绿色，把细胞浆和细胞核中的核仁染成红色或红紫色的染色液。甲基绿又称双绿SF，属于碱性染料，是具有金属光泽的绿色微结晶或粉末，分子量为608.78，分子式为C₂₇H₃₅Cl₄N₃Zn。甲基绿和细胞核中的DNA结合，从而使细胞浆和核仁染成红色或红紫色。

甲基绿-派洛宁染色液经过改良，不含甲醇，在组织或细胞染色中对细胞核进行染色，其中的甲基绿经过提纯，更容易着色。本染色液也可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。10ml染色液可以染色20个样本。

自备材料：

1、 系列乙醇、蒸馏水

2、 滤纸、RNase（可选）

3、 丁三醇或丙酮或正戊醇

4、 4%多聚甲醛

操作步骤（仅供参考）：

（一） 石蜡切片染色

1、 组织入Carnoy固定液或10%中性福尔马林，固定3~5h。

2、 切片5μm，常规脱蜡至水，蒸馏水稍洗。

3、 入Methyl Green-Pyronin Stain ，室温浸染30~60min。

4、 取出切片，用滤纸稍微吸干切片周围染色液。

5、 用丁三醇（也可用丙酮或正戊醇）冲洗3次，每次2~3min。

6、 二甲苯透明，中性树胶封固。

（二） 冰冻切片染色

1、 蒸馏水冲洗2min。

2、 切片入Methyl Green-Pyronin Stain ，室温浸染25~50min。

3、 用蒸馏水冲洗2次，此时样本呈蓝色。

4、 余下步骤同石蜡切片染色。

（三） 细胞染色

1、 用4%多聚甲醛固定10min以上。

2、 蒸馏水洗涤2min。

3、 换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。

4、 用Methyl Green-Pyronin Stain染色5~10min。显微镜下观察。

（四） 荧光染色

1、 如果进行免疫荧光染色，在染色后应70%乙醇洗涤2次，每次2min。

2、 95%乙醇脱水2min。

3、 PBS或生理盐水或TBS等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5min。

4、 进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色。

阴性对照：

1、 取另外一张连续切片入RNase(1mg/ml)，37℃恒温箱内孵育3h，蒸馏水冲洗干净。

2、 入Methyl Green-Pyronin Stain染色，余下步骤同上。RNA染色结果为阴性。

注意事项：

1、 首次使用染色液时建议先取1~2个样品做预实验。

2、 Methyl Green-Pyronin Stain染色可以根据染色结果和要求调整时间。

3、 有些粘液细胞有可能被派洛宁染成红色，应注意区分。