细胞生物学试剂

Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)

基本信息
产品名称:
Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)
英文名称:
Cell Counting Kit-8
国产/进口:
国产
产地/品牌:
广州博鹭腾
型号:
100T/500T/1000T
参考报价:
总点击数:
301
更新日期:
2024-07-23
产品类别:

性能参数

产品规格
 
*详情可联系客服咨询

产品简介
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450 nm波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。
CCK-8法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

产品特点
  • 检测液呈淡黄色,加入培养基后可以明显看到颜色变化,避免漏加或者多加检测液;
  • 检测液的稳定性较好,较高温度保存或运输不易变质;
  • 优化了WST-8与2-甲基-1,4-萘醌的配比,提供了更高的检测灵敏度,检测范围比过往试剂盒更宽。
保存条件
冰袋运输,2-8℃避光保存一年有效,-20℃避光保存两年有效。

使用说明
. 制作标准曲线(测定细胞具体数量)
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。
2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

. 细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2)。
2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
3、将培养板在培养箱内孵育1-2小时。
4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

. 细胞增殖-毒性检测
1、在96孔板中配制100 μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。
2、向培养板加入10 μL不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。
4、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
 
活力计算
细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

注意事项
1. 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
2. 有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基液面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。
3. 白细胞可能需要培养较长时间。
4. 当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
5. 如果没有450 nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。
6. 培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研使用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内!
公司简介

广州博鹭腾生物科技有限公司坐落在广州科学城,占地近3000平米,专注于光子信号的高效率接收识别技术的开发,并将此技术应用于生命科学研究、医学诊断服务、生物制药和细胞治疗等领域,集研发、生产、服务于一体,是目前国际上极少数可以提供一系列光子检测设备和试剂的专业化公司。

博鹭腾以“科技点亮生命之光”为理念,不断发展自身的研发实力,与国内外多所高校和科研院所建立长期稳定的技术合作,同时也建立起一支由多名博士、硕士研究生组成的高水平研发管理团队,公司研发人员占比近50%,在生命科学工具领域不断取得突破。公司获评2015年“广州市科技创新小巨人”,2017和2020年国家高新技术企业,2020-2022连续三年获评黄埔区瞪羚培育企业,2021年度广州市“专精特新”(两高四新)企业,2022年度获评广东省“专精特新”企业。

博鹭腾目前主要开发四大系列产品,分别是分子影像系列、细胞影像系列、活体影像系列及相应配套的试剂耗材。

博鹭腾开发了一系列与仪器设备配套的试剂盒,主要有动物活体成像发光底物,ECL增强型发光液,核酸染料,荧光探针等。博鹭腾建有300平米十万级标准的试剂研发和生产车间,可以为广大的用户提供高质量的试剂和耗材。

另外,博鹭腾也建有高标准的动物房,细胞房,生物实验室等,具有较强的技术服务能力。能够进行包括PCR检测、核酸凝胶电泳检测、western blot蛋白表达检测、活体成像检测等服务,基本覆盖分子生物学从分子水平、细胞水平到活体水平的实验需求。


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