简介:
D-葡萄糖酸存在于许多食品和饮料中,如葡萄酒、软饮料、醋、肉类、果汁、乳制品、大米和蜂蜜。这种非挥发性有机酸具有酸味,但口感清爽,鉴于其存在于许多天然食品和人体代谢中,已被授予GRAS地位。乙醇和甘油与D-葡萄糖酸的比例是葡萄酒行业的质量指标。受灰霉病感染的葡萄表现出这种酸水平的增加,可达1-2g/L。D-葡萄糖酸还有许多其他应用,包括膳食补充剂、洗涤剂和食品腌制。D-葡萄糖酸-δ-内酯与D-葡萄糖酸结合,例如在葡萄酒中,也广泛应用于食品工业。含有D-葡萄糖酸-δ-内酯的食品包括豆腐、酸奶、白干酪、面包、糖果和肉类。
原理:
D-葡萄糖酸(D-葡萄糖酸)被腺苷-5'-三磷酸(ATP)和葡萄糖酸激酶(GCK)磷酸化为D-葡萄糖酸-6-磷酸,形成腺苷-5'--二磷酸(ADP)(1)。
(GCK)
(1) D-葡萄糖酸盐+ATP——> D-葡萄糖酸6-P+ADP
在烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)存在的情况下,D-葡萄糖酸-6-磷酸被6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)氧化脱羧为核酮糖-5-磷酸,形成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐(NADPH)(2)。
(6-PGDH)
(2) D-葡萄糖酸6-P+NADP+——>核酮糖-5-P+NADPH+CO2+H+
在该反应中形成的NADPH的量与D-葡萄糖酸的量是化学计量的。NADPH是通过340nm处吸光度的增加来测量的。D-葡萄糖酸-δ-内酯在碱性水解后根据相同的原理测定(3)。
(pH 11)
(3) D-葡萄糖酸-δ-内酯+H2O ——> D-葡萄糖酸盐
套件:
手动格式60次测定(或自动分析仪格式600次测定或微孔板格式600次检测)的试剂盒。试剂盒包含:
瓶1:缓冲液(12.5 mL,pH 7.6)加叠氮化钠(0.02%w/v)作为防腐剂。
在4°C下稳定2年以上。
瓶2:NADP+ATP。在-10°C以下稳定5年以上。
瓶3: 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶悬浮液(1.25 mL)。在4°C下稳定2年以上。
瓶4:葡萄糖酸激酶悬浮液(1.25 mL)。在4°C下稳定2年以上。
瓶5:D-葡萄糖酸钠(约2克)。稳定>5年;在室温下密封储存。
试剂溶液/悬浮液的制备:
1.使用随附的瓶子1中的内容物。
在4°C下稳定2年以上。
2.将瓶子2的内容物溶解在12.5毫升蒸馏水中。
在4°C下稳定约4周,或在-10°C以下稳定>2年(为避免重复的冻融循环,分为适当大小的等分试样并储存在聚丙烯管中)。
3 & 4.使用随附的瓶子3和4中的内容物。在第一次打开之前,摇动瓶子以去除可能沉积在橡胶塞上的任何酶。随后,将瓶子垂直存放。使用前,将瓶子旋转以混合内容物。
在4°C下稳定2年以上。
5.精确称取约279 mg D-葡萄糖酸钠(MW=216.13),精确到0.1 mg,放入1 L容量瓶中。用蒸馏水填充至标记处并充分混合(相当于约0.25 g D-葡萄糖酸/L)。在-10°C以下储存10 mL等分的该溶液。
在-10°C以下稳定2年以上。
注:D-葡萄糖酸标准溶液仅在对所用分光光度计的准确性有疑问或怀疑样品中的物质引起抑制的情况下进行测定。D-葡萄糖酸的浓度直接由NADPH的消光系数决定。
概要:
D-葡萄糖酸/D-葡萄糖酸-δ-内酯检测试剂盒适用于食品和饮料中D-葡萄糖酸-D-葡萄糖酸内酯的特定测量和分析。
说明:如果所有体积减半,使用MegaQuantTM波分光光度计(D-MQWAVE)可使手动测试次数加倍。
规格:60项测定(手动)/600项测定(微孔板)/600种测定(自动分析仪)
运输温度:环境温度
储存温度:短期稳定性:2-8°C,
长期稳定性:见单个组件标签
稳定性:在推荐的储存条件下>2年
分析物:D-葡萄糖酸盐、D-葡萄糖酸-δ-内酯
分析格式:分光光度计、微孔板、自动分析仪
检测方法:吸光度
波长(nm):340
信号响应:增加
线性范围:每次测定0.8至50µg D-葡萄糖酸
检测限:0.792 mg/L
反应时间(分钟):~6分钟
应用示例:葡萄酒、肉类、加工肉类(如添加剂)、果汁、乳制品、药品、纸张和其他材料(如生物培养物、样品等)。
方法识别:基于这一原则的方法已被ISO、DIN和GOST接受