细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒
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描述
蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白、细胞浆蛋白、细胞膜蛋白与细胞骨架蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞浆蛋白、细胞核蛋白、细胞膜蛋白与细胞骨架蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
使用方法
1.试剂准备
1.1准备溶液
1.1.1室温融解试剂盒中的各种溶液，溶解后除结构蛋白提取液外，其他试剂立即置于冰上；
1.1.2 结构蛋白提取液溶解后，可放置于37°C水浴中温浴至透明后，常温放置。
1.2蛋白提取工作液的准备
1.2.1胞浆蛋白提取工作液的准备：临用前，根据处理样品的量估算实验时胞浆蛋白提取液的需要量，并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。
1.2.2胞核蛋白提取工作液的准备：临用前，根据处理样品的量估算实验时胞核蛋白提取液的需要量，并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。
1.2.3膜蛋白提取工作液的准备：临用前，根据处理样品的量估算实验时膜蛋白提取液的需要量，并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。
1.2.4 结构蛋白提取工作液的制备：临用前，根据处理样品的量估算实验时结构蛋白提取液的需要量，并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。
2、对于培养细胞样品：
2.1胞浆蛋白提取
2.1.1加2.0ml（2.0×107细胞 ）的胞浆蛋白提取工作液，在4°C条件下震荡20分钟；
2.1.2准备1-5ml的注射器，用注射器吹打步骤1震荡过的溶液50-90次，在4°C条件下，15000g离心10分钟。取上清液存于EP管中，即为胞浆蛋白；
2.2胞核蛋白的提取
取2.1.2步骤获得的沉淀物加入4.0ml/20million cells冰浴的胞浆蛋白提取工作液，在4°C条件下震荡5分钟，4°C条件下15000g离心10分钟，弃去上清液，沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰冻的胞核蛋白提取工作液, 在4°C条件下震荡5分钟，4°C条件下15000g离心10分钟，上清液为细胞核蛋白，转入EP管并保存。
2.3胞膜蛋白的提取
在步骤2.2中的沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰冻的膜蛋白提取工作液, 在4°C条件下震荡5分钟，4°C条件下15000g离心10分钟，上清液为细胞膜蛋白，转入EP管并保存。
2.4结构蛋白的提取
在步骤2.3的沉淀物中加入常温或37°C水浴过的透明的结构蛋白提取工作液 0.5ml/20million cells，4°C条件下震荡5分钟，4°C条件下15000g离心10分钟，保存上清液即为细胞骨架蛋白。
2.5待测蛋白的保存
待检测浓度的蛋白存于-70°C。
3.对于组织样品：
3.1胞浆蛋白提取
3.1.1加2.0ml/g的胞浆蛋白提取工作液,在4°C条件下研磨，重复匀浆两次，至全部溶解；
3.1.2在4°C条件下，震荡5分钟，18000g离心10分钟。取上清液存于EP管中，即为胞浆蛋白，沉淀物继续实验。
3.2胞核蛋白的提取
在步骤3.1.2中的沉淀物中加4.0ml/g的胞浆蛋白提取工作液,在4°C条件下震荡5分钟，4°C条件下18000g离心10分钟，弃去上清液；沉淀物中加1.0ml/g冰冻的胞核蛋白提取工作液, 在4°C条件下震荡5分钟，4°C条件下18000g离心10分钟，上清液为细胞核蛋白，转入EP管并保存；
3.3胞膜蛋白的提取
在步骤3.2中的沉淀物中加1.0ml/g冰冻的膜蛋白提取工作液, 在4°C条件下震荡5分钟，4°C条件下18000g离心10分钟，上清液为细胞膜蛋白，转入EP管并保存。
3.4结构蛋白的提取
3.4.1在步骤3.3中的沉淀物中加入常温或37°C水浴过的透明的结构蛋白提取工作液0.5ml/g，震荡5分钟，4°C条件下18000g离心10分钟，保存上清液；
3.4.2在3.4.1步中的沉淀物中加1.5ml/g冰冻的胞浆蛋白提取工作液, 在4°C条件下震荡5分钟，4°C条件下18000g离心10分钟,保存上清液；
3.4.3混合前两步的上清液，此为骨架蛋白。
3.5待测蛋白的保存
待检测浓度的蛋白存于-70°C。
温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究
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