ACA 小鼠抗中性粒/中心体抗体ELISA

操作流程：

实验前准备
‌试剂盒平衡‌：将试剂盒从冰箱取出，置于室温平衡20-30分钟，确保所有试剂恢复至室温‌。
‌组分核对‌：打开试剂盒，根据说明书核对组分是否完整（如酶标板、标准品、洗涤液、底物等）‌。
‌样本处理‌：若检测样本为血清或血浆，需4℃离心（1000g，5分钟）去除杂质‌。
标准品配制
‌溶解标准品‌：将冻干标准品离心后，加入指定体积的稀释液（如1mL），静置10分钟至完全溶解‌。
‌梯度稀释‌：准备7-8个EP管，每管加入稀释液（如250μL），从高浓度开始进行2倍稀释，最后一管为空白对照‌。
加样与孵育
‌加样‌：将标准品、样本及空白对照分别加入酶标板孔中（每孔100μL），注意更换枪头避免交叉污染‌。
‌孵育‌：覆膜后放入37℃恒温箱，孵育60-90分钟‌。
洗涤步骤
‌倒液拍干‌：孵育后甩尽孔内液体，每孔加入300-350μL洗涤液，浸泡30秒后倒出，重复洗涤3-5次‌。
‌拍干‌：在吸水纸上拍干板内残留液体‌。
操作步骤：

1．从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2．设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。
3．样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。样本不足，或者样本浓度过高，可用样本稀释液做稀释。
4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5．弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
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