双功能荧光底物实现活细胞 Caspase-3 活性检测并同时染色细胞核DNA
 

DEVD-NucView 488 Caspase-3 底物是Biotium公司开发的一系列在活细胞内实时检测Caspase活性的NucView Caspase 底物中的第一个产品。不同于传统的caspase酶检测方法，Biotium 公司发明了一种创新的荧光底物设计技术，将底物的一部分连接到功能性染料上，从而使这些染料失去功能。利用这种方法设计的荧光底物在酶切之后，染料能被释放出来恢复功能并能结合目标分子释放荧光（图2）。
对于DEVD-NucView 488 Caspase-3底物，Biotium 将一段带有大量负电荷的DEVD肽连接到一种和DNA结合的染料上。这些负电荷使得该染料不能结合DNA，也就不能产生荧光（图6）。这种底物可以快速的穿过细胞膜进入细胞质并在这里被Caspase-3剪切，从而释放出和DNA有高亲和力的染料。释放出来的染料可以迁移进入细胞核并把细胞核染成亮绿色（图1）。因此，这种双功能底物让研究人员在凋亡细胞内检测Caspase-3活性的同时染色细胞核，显示细胞核在凋亡过程中经历的形态学变化。在众多凋亡的细胞内，不同细胞可能处在不同时期并经历着凋亡过程中的不同事件，因而研究中很

重要的一点就是能实时独立的跟踪这些事件，从而更好的了解事件之间的相互关系。DEVD-NucView 488 Caspase-3底物结合Biotium公司开发的其他荧光探针，是通过荧光显微镜和/或者流式细胞仪来研究这些不同事件的时间、空间关系的强有力工具（图4）。

Biotium公司现提供两种活细胞Caspase-3检测试剂盒。产品＃30029包含DEVD-NucView 488 Caspase-3底物和Caspase-3抑制剂，足够在流式细胞仪或荧光显微镜上进行至少100次实验。产品＃30030是一种双凋亡检测方法试剂盒，包含DEVD-NucView 488 Caspase-3底物和用来检测磷酸化丝氨酸（PS）转位的红色荧光sulforhodamine 101-annexin V，足够在流式细胞仪或荧光显微镜上进行至少50次实验。使用两种产品的具体实验步骤可以从Biotium网站上下载。