蔗糖/D-果糖/D-葡萄糖检测试剂盒K-SUFRG
蔗糖/D-果糖/D-葡萄糖检测试剂盒适用于植物和食品中蔗糖、D-葡萄糖和D-果糖的测定和分析。
如果所有体积减半,每个试剂盒的手动检测次数可增加一倍。这可以很容易地适应使用兆量子波分光光度计(D-MQWAVE)。
简介:
蔗糖、D-葡萄糖和D-果糖存在于大多数植物和食品中。在植物材料中,D-葡萄糖和D-果糖以游离糖的形式存在于蔗糖中,并存在于一系列低聚糖(半乳糖基蔗糖低聚糖和低聚果糖)和多糖中,如果聚糖(菊粉)、淀粉、1:3,4-β-D-葡聚糖和纤维素。在食品中,它们大量存在于蜂蜜、葡萄酒和啤酒中,以及面包和糕点、巧克力和糖果等一系列固体食品中。在葡萄酒行业中,只允许在少数情况下添加蔗糖,例如在香槟的生产中。
原理:1-3
β-果糖糖苷酶(转化酶)水解蔗糖前后测定D-葡萄糖浓度。在磷酸葡萄糖异构酶(PGl)异构化后,在测定D-葡萄糖后测定样品的D-果糖含量。
D-葡萄糖测定:在pH 7.6时,己糖激酶(HK)催化腺苷-5'-三磷酸(ATP)将D-葡萄糖磷酸化为葡萄糖-6-磷酸(G-6-P),同时形成腺苷-5'--二磷酸(ADP)(1)。
(HK)
(1)D-葡萄糖+ATP——>G-6-P+ADP
在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6P.DH)存在的情况下,G-6-P被烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)氧化为葡萄糖酸-6-磷酸,形成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)(2)。
(G6P-DH)
(2) G-6-P+NADP+——>葡萄糖酸-6-磷酸+NADPH+H+
在该反应中形成的NADPH的量与D-葡萄糖的量是化学计量的,它是通过在340nm处吸光度的增加来测量的NADPH。
D-果糖测定:己糖激酶还催化腺苷-5'-三磷酸(ATP)对D-果糖果糖-6-磷酸(F-6-P)的磷酸化(3)。
(HK)
(3) D-果糖+ATP——>F-6-P+ADP
F-6-P随后被PGl(4)转化为G-6-P。
(PGI)
(4) F-6-P——>G-6-P
G-6-P依次与NADP+反应,形成葡萄糖酸-6-磷酸和NADPH,导致吸光度进一步上升,与果糖的量成化学计量比。
蔗糖水解:
在pH 4.6时,蔗糖被β果糖酶水解为D-葡萄糖和D-果糖。
(β-果糖基酶)
(5) 蔗糖+H2O——>D-葡萄糖+D-果糖
如上所述,测定蔗糖水解后样品中的D-葡萄糖(总D-葡萄糖)。
蔗糖含量是通过β果糖酶水解前后D-葡萄糖浓度的差异来计算的。
套件:
Megazyme提供适用于进行100次蔗糖、D-葡萄糖和D-果糖测定的试剂盒。试剂盒包含荧光分析法以及:
瓶1:缓冲液(25 mL,pH 7.6)加叠氮化钠(0.02%w/v)作为防腐剂。在4°C下稳定2年以上
瓶2:NADP++ATP。在-10°C以下稳定5年以上
瓶3:己糖激酶加葡萄糖-6-磷酸脱氢酶混悬液(4.1 mL)。在4°C下稳定>2年。
瓶4:磷酸葡萄糖异构酶悬浮液(2.25mL)。在4°C下稳定2年以上。
瓶5: D-葡萄糖加D-果糖标准溶液(每种糖5mL,0.2mg/mL)。在4℃下稳定>2年。
瓶6: β-果糖(pH 4.6),冻干粉。在-10°C以下稳定2年以上。
试剂溶液/悬浮液的制备:
1. 使用随附的瓶子l中的内容物。在4°C下稳定2年以上。
2. 将瓶子2的内容物溶解在22毫升蒸馏水中,在4摄氏度下稳定>1年,或在10摄氏度以下稳定>2年(为避免重复的冻融循环,请分成适当大小的等分试样并储存在聚丙烯管中)。
3和4. 使用提供的瓶子3和4中的内容物。在第一次打开之前,摇动瓶子以去除可能附着在橡胶塞上的任何酶。随后,将瓶子垂直存放。使用前将瓶子旋转以混合内容物,在4°C下稳定2年以上。
5. 在4°C下使用供应的瓶子5中的内容物稳定2年以上。
概要:
规格: 每个试剂盒300次检测(每次100次)
分析物: D-果糖、右旋葡萄糖、蔗糖
化验格式: 分光光度计
检测方法: 吸光度
波长(nm): 340
信号响应: 增加
线性范围: 每次测定4至80克右旋葡萄糖、右旋果糖或蔗糖
检测限: 1.38毫克/升
反应时间(分钟): ~20分钟
应用实例: 啤酒、果汁、软饮料、牛奶、果酱、蜂蜜、食疗食品、面包、烘焙产品、乳制品、糖果、甜点、糖果、冰淇淋、水果和蔬菜(如土豆)、肉制品(如香肠)、调味品(如番茄酱和芥末)、饲料、烟草、化妆品、药品、纸张和其他材料。
方法识别: 基于这一原则的方法已被国家自然科学基金、欧洲国家自然科学基金、NEN、德国国家自然科学基金、德国国家科学技术学院、IFU、美国医学科学院、美国医学科学院和国际癌症中心所接受
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