细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒

产品简介：

Ø 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒(Senescence β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
Ø 绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。衰老(senescence)的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。衰老细胞细胞通常体积变大，表达pH6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
Ø 碧云天生产的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒，以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。参考图1。


图1. 正常细胞和衰老细胞用细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒染色后的示例图片。

Ø 本试剂盒仅染色衰老细胞，不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞
(immortal cells)或肿瘤细胞。
Ø 如果使用6孔板检测，足够测定100个样品；使用24孔板测定，足够测定400个样品；使用96孔板测定，足够测定1000个样品。对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定。对于普通的切片也至少足够检测100个样品。







包装清单：

产品编号 产品名称 包装
C0602-1 β-半乳糖苷酶染色固定液 100ml
C0602-2 X-Gal溶液 5ml
C0602-3 β-半乳糖苷酶染色液A 1ml
C0602-4 β-半乳糖苷酶染色液B 1ml
C0602-5 β-半乳糖苷酶染色液C 100ml
— 说明书 1份





保存条件：

-20℃保存，一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。



注意事项：

Ø β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意防护。

Ø β-半乳糖苷酶染色液B在刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或Vortex后，沉淀会全部溶解。作为常规，试剂使
用前必须确保沉淀全部溶解，并且混匀。
Ø 需自备PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。
Ø 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。



使用说明：


1. 对于贴壁细胞：
a. 对于6孔板中培养的细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15分
钟。对于其它类型的培养板，固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。
b. 吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞3次，每次3分钟。
c. 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器，不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器
配制染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。
表1. 染色工作液的配制方法。
β-半乳糖苷酶染色液A 10微升
β-半乳糖苷酶染色液B 10微升
β-半乳糖苷酶染色液C 930微升
X-Gal溶液 50微升

说明：对于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的简单的判定方法是：聚丙烯容器可以高温高压灭菌；而聚苯乙烯容器不适合高温高

压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。

d. 37℃孵育过夜，可以用parafilm或保鲜膜封住6孔板防止蒸发。

e. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存数天；或者加上封片液
封片后，4℃可以保存较长时间。
2. 对于悬浮细胞：
a. 离心收集细胞至1.5ml离心管内，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15分钟。固定时可
以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。

b. 离心，吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞3次，每次3分钟。

c. 离心，吸除PBS或HBSS，每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。

d. 37℃孵育过夜。

e. 取部分染色后的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工
作液，然后加入1毫升PBS，4℃可以保存数天。如果离心，取细胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存较长时间。

3. 对于组织切片：
a. 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡和水化处理。对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。
b. 加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于15分钟。
c. 用PBS浸泡洗涤组织3次，每次不少于5分钟。
d. 吸除PBS，加入适当量的染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。
e. 37℃孵育过夜，可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发。最好把整个切片浸泡在染色工作液中。
f. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察，加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。