免疫组化实验技术对外服务

简介：             

免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
免疫组化的分类：
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。
免疫组化主要步骤
1.   洗载玻片:   将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,目的是为了是载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右),再将载玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys带正电，而大多数的组织带负电荷，从而产生吸附作用。
2.  包埋组织:   先在铁模具中加入一些液态石蜡，先稍微冷却，然后再将待包埋的组织置于石蜡之中，并排列整齐，再将塑料模具盒盖上，最后加入少许液体石蜡，进行冷冻，使石蜡变成固态。
3.   切片：    将包埋好的组织从模具上取下来，并置于石蜡切片机上，切片机通过调节上下左右来来使组织和切割方向一致，然后调节切片的厚度，一般为5µm,如果比较难切，则可以适当调整厚度，用毛笔将切割的载玻片向外拉，并用小镊子将包含有完整组织的载玻片置于40°C温水中。
4.  捞组织：   当组织载玻片置于40°C温水中之前，要先将水浴中的气泡赶走，以免气泡受热上浮而贴到组织上，组织受热展开，最好是组织不起皱纹，用载玻片捞组织时，一般取载玻片的下1/3或者下1/2一般每种组织捞5-6张，其中2-3张是备用的，每张载玻片上通常捞两份组织，做对照使用，这样形成的误差就比较小了，而且捞载玻片的时候最好方向一致，以便观察，再将捞出来的载玻片置于架子上，放入37°C温箱中烘干。
5.   脱蜡：   依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脱蜡作用的主要是二甲苯,依据的是相似相溶的原理.一般在每个试剂中放10min,天气热可以少放几分钟,相反,天气较冷的话,就要适当延长脱蜡时间,一般为12-15min.
6.  抗原修复：  脱蜡后在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2浸泡10min，从而除去内源性的过氧化氢酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），一般刚到沸腾即可，冷却至室温，然后再蒸煮一次，冷却至室温，蒸煮的目的是为了使抗原的位点暴露出来。
7. 血清封闭：   冷却至室温后，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS中5min，洗2次，擦干组织周围的PBS液，马上加上血清，使一些非特异性的位点封闭起来，然后放入37°C温箱中半小时。血清稀释10倍（900µlPBS：100µl血清封闭液）。
8.  加一抗：   将温箱中的载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，加一抗，如果做对照实验，就在对照的组织上加PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜。
9.  加二抗：   将载玻片从冰箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。
10. 加SABC:    将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上SABC, 然后置于37°C温箱中半小时。SABC稀释100倍（990µlPBS：10µlSABC）。
11. 加显色剂：  将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上显色剂。（显色剂的配置：在1ml水中加1滴显色剂A，摇匀，然后加1滴显色剂B，摇匀，再加1滴显色剂C，摇匀）   A：DAB        B：H2O2        C：磷酸缓冲液
12.  复染：   将显色后的片子用清水冲洗一段时间后，浸泡于苏木精中染色，一般动物组织为半分钟，植物组织3-5min。
13.  脱水：将复染后的片子置于水中冲洗后，依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每个试剂中放置2min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通风柜中。
14.  封片：  用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好片子后置于通风柜中晾干。

免疫组化的相关试剂：

最重要的是选择好一抗、二抗或者还有三抗，注意抗体的特异性、效价和交叉反应，最好用单抗。
其他常用试剂有：
1、0.01M(pH7.4)的磷酸盐缓冲生理盐水（PBS），稀释抗体和洗片子用；
2、清洁液、纯水，洗玻片用
3、多聚赖氨酸处理载玻片，防止脱片
4、固定液：4%多聚甲醛或冷丙酮等；
5、15%~30%蔗糖，组织脱水用；
6、梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，或者OCT包埋做冰冻切片；
7、抗原修复液：枸橼酸缓冲液（pH6.0）；
8、活化剂：EDTA或者Triton X-100；
9、1%~10%牛血清清蛋白（BSA）封闭液；
10、H₂O₂，灭活内源性过氧化物酶；
11、显色液：根据你做的酶来选择，如果是HRP就用DAB，如果是AKP，就用NBT/BCIP，免疫荧光则不需要；
12、50%缓冲甘油封片液。
 

【本平台合作项目】

分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！

【全国免费热线】：400-675-6758

【电话】 023-65316016,023-65316556

【邮箱】 china-western@163.com

【官网网址】www.cqwestern.com

【地址】 重庆高新区生物医药研发产业园D栋

  公司简介

重庆威斯腾生物医药科技有限责任公司（简称“威斯腾生物”）是重庆高圣医药有限责任公司参与组建，放眼于全球生物医药前沿技术转化应用开发，立足于全国生物医药研发检测合作及项目孵化、成果转化，现在发展为一家集生物医药技术转化、分子诊断产品开发及创新生物药物开发的科技集团公司。威斯腾生物致力于重大疾病包括恶性肿瘤、重大传染病等领域的早期筛查及快速检测。公司总部设立于重庆高新区，同时在上海和北京设有管理团队和运行机构。 
威斯腾生物拥有专家顾问团队千人专家7人，长江学者2人，海外院士2人；现有固定研发人员100余人同时还拥有320人的海外科研顾问团队。拥有完善的基础实验平台、先进的实验设备、专业的技术团队、标准的操作流程、优质的合作平台和强大的科学家网络，可为国内外研发机构与药企提供专业的生物研发检测合作和科技成果转化项目指导。七大基础服务平台包括：细胞生物学研究平台、分子生物学研究平台、病理学研究平台、免疫学研究平台、动物模型研究平台、蛋白质与多肽研究平台、测序和芯片研究平台。此外，公司拥有四大创新研发中心：分子诊断开发平台,CRISPR/Cas9靶向基因修饰药物开发平台、纳米靶向载药创新平台、创新药物筛选平台，除了进行公司的研发项目外，还可为从事相关研究的团队和企业提供个性化服务。
威斯腾生物研发中心一直致力于高端分子诊断产品的创新研发，拥有国内外处于领先地位的核心技术包括超微量核酸快速提取技术、快速荧光原位杂交（FISH）技术，CRISPR/Cas9基因定点编辑技术，荧光量子点材料开发和运用，医学模式动物开发等。
重点研发领域包括肺癌、结直肠癌、乳腺癌等恶性肿瘤的快速早期诊断，目前已成功开发非小细胞肺癌快速FISH诊断试剂盒、乳腺癌快速FISH诊断试剂盒、超微量粪便核酸快速诊断结直肠癌试剂盒等产品，其中非小细胞肺癌快速FISH诊断试剂盒入选重庆市技术创新与应用示范专项（产业类）重点研发项目名单，获中国生物医药创新创业项目最具投资价值TOP10评选赛北京站荣获一等奖、第八届中国创新创业大赛生物医药行业组重庆赛区冠军等。
同时，公司在重大传染病的快速检测及诊断上进行了研发布局，包括结核、EV71手足口病等重大传染病的快速诊断，拥有项目包括超微量尿液核酸检测结核试剂盒、量子点荧光标记传染病快速检测试剂盒等。新冠病毒疫情爆发后，威斯腾生物第一时间组建“新型冠状病毒试剂盒紧急研究小组”及“新型冠状病毒研发物资采购小组”，自筹经费成功研发新型冠状病毒（2019-nCoV）快速核酸检测试剂盒（免核酸提取荧光PCR一步法）、新冠病毒粪便RNA核酸提取试剂盒。产品已提供给20家以上的疾控中心和公共卫生中心使用，并与以上第三方疾控中心/公共卫生中心建立起了长期稳定的试用关系。
威斯腾生物是国家高新技术企业、科技型企业、市级新型研发机构、专精特新企业、北京市海淀区生物医药与大健康协会副会长单位、重庆市医药行业协会副会长单位。下属研发平台被认定为“中关村生物医药共享平台”、“中关村海淀区生物医药公共研发检测平台”、“重庆市生物医药检测共享平台”等。公司多次在全国性比赛中获奖，2019年荣荣获第八届中国创新创业大赛生物医药行业组重庆赛区冠军。
同时，威斯腾生物积极参与国际技术转移、成果转化相关合作，与美国、澳大利亚、新加坡等相关高校、研究院所建立了深厚的联系和多元化的合作，公司坚持以“技术创新、机制创新，文化创新，管理创新，战略创新”的理念，为重大恶性肿瘤、传染病疾病等领域的创新研发而不懈努力。
 

  核心竞争力

• 荧光量子点材料开发和运用
• 快速荧光原位杂交（FISH）
• CRISPR/Cas9基因定点编辑技术
• 基因芯片诊断
• ChIP表观遗传研究
• 医学模式动物开发

产业布局：

• 科技服务
• ctDNA,CTC液体活检
• 病理医学诊断
• PDX肿瘤筛查
• POCT产品开发
• IVD产品开发
• 分子医学诊断
• 创新研发系统

  行业交流

  2015年12月 由中国医药企业发展促进会、中国医药科技成果转化中心主办，重庆市医药 产业发展办公室指导，威斯腾生物医药承办的“首届2015·中国（重庆）生物医药前沿技术与产业化发展研讨会”在重庆渝州宾馆隆重举行；

  2016年4月  新加坡工程院院士、美国电子工程院连勇院士到威斯腾生物医药交流访问；

  2016年6月  美中药协（SAPA）总会前会长、美国强生公司研发总监、美国药学家协会院士戴卫国博士到威斯腾生物医药交流访问；

  2016年6月  威斯腾生物医药受邀参加第二届药学进展前沿高峰论坛；

  2016年8月  威斯腾生物医药受邀参加2016北京生物医药科技成果展示暨项目推介会；

  2016年10月  威斯腾生物医药受邀参加“科技部科技成果直通车暨首届科技成果路演活动”；

  2016年10月  威斯腾生物医药受邀参加2016中国（泰州）抗体药物高峰论坛；

  2016年11月  威斯腾生物医药受邀参加中国医药企业发展促进会第三次会员代表大会；

  2016年11月  威斯腾生物医药成为诺奖医学峰会投资委员会常务委员单位；

  2016年12月  威斯腾生物医药受邀参加北京市海淀区生物与健康产业协会第一届会员大会暨2016中关村核心区生物与健康产业发展高峰论坛；

  2017年1月   威斯腾生物医药受邀参加首届国际未来论坛；

  2017年1月   威斯腾生物医药受邀参加第二届中国天使两会双创年度盛典；

  2017年3月  北京生物技术和新医药产业促进中心潘悦主任一行到威斯腾生物医药交流访 问；

  2017年4月   威斯腾生物医药受邀参加四川省人民政府主办的医药健康产业深度合作和创新发展座谈会。

  企业文化

  公开透明的竞争文化机制

  竞争文化的培养是企业文化着重培养的重要内容，良好的竞争氛围使每位员工不甘落后和停滞。采取正确的竞争策略，能够极大地调动企业员工的积极性、创造性，焕发出竞争精神和创新精神，使人的潜能得到全面、充分地发挥，从而使整个企业的竞争能力得到全面地提高。

  公开透明的竞争机制的建立，使每位员工看到并享有畅通的晋升通道，保证每位员工在威斯腾都能一展所长。

  重视素质培养和全面发展

  威斯腾非常注重企业文化的建设，提倡“以人为本”的人才理念，关注员工的持续成长，倡导正能量，形成“勤奋，忠诚，热情，向上”的企业文化。

  素质是人的品质、能力、素养的总称，企业员工的职业素质是影响企业管理与发展的重要因素。高素质的人才，不在于经验的长久，而在于长久的经验培育出来的能力。提升员工素质是揭示各个方面及竞争力的利器。员工个人不仅可以参加企业组织的各种培训，还主动积极的进行自我学习与提高，不断的修炼自我，提高自身的职业素质，从而达到与时俱进，增强竞争力。

  和谐“家”文化

  公司提倡和谐“家”文化，致力于为员工提供良好的办公环境、营造轻松舒适的办公氛围，公司在对员工关怀上下足了工夫，让每一位企业员工真正感受企业文化的力量。”威斯腾管理委员会委员如是表示。一个好的公司，不能仅仅只注重品牌的打造，更要重视人才、重视技术、重视企业文化建设。这就是一个富有朝气，活力的威斯腾生物！