免疫与抗体

酶联免疫(ELISA)

基本信息
服务名称:
酶联免疫(ELISA)
英文名称:
参考报价:
13910837690
总点击数:
3479
更新日期:
2021-01-06
服务类别:

服务详情
酶联免疫(ELISA)
 

 

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体②酶标记的抗原或抗体③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。即:夹心ELISA、间接ELISA、竞争ELISA。
夹心ELISA
双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:
将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体,洗涤除去未结合的抗体及杂质。
加受检标本: 使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
根据同样原理,将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物,即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。
间接ELISA
间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。
操作步骤如下:
将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质
加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合,在洗涤过程中被洗去。
加酶标抗抗体:与固相复合物中的抗体结合,从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体,可用酶标羊抗人lgG抗体。
加底物显色:颜色深度代表标本中受检抗体的量。
本法只要更换不同的固相抗原,可以用一种酶标抗抗体测各种与抗原相应的抗体。
竞争ELISA
竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下:
将特异抗体与固相载体连接,形成固相抗体,洗涤。
待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体之反应。如受检标本中无抗原,则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原,则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合,竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会,使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原,保温后,酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量,洗涤。
加底物显色:参考管中由于结合的酶标抗原最多,故颜色最深。参考管颜色与待测管颜色深度之差,代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡,表示标本中抗原含量越多。
结果计算:
根据标准品浓度和OD值绘制标准曲线(如图所示),按照检测样本的OD值在标准曲线上求出浓度值。
【ELISA标本收集】
◇液体类标本:
包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
◇血清:
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
◇血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
◇尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
◇细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
◇组织标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
收费标准:
凡购买本公司目录任何一种检测试剂盒(酶联免疫、放射免疫),您只需将需要检测的样品和检测指标及标本数量(48T/96T)告知我公司业务人员即可,免收检测费用。在接到客户标本当日起,7个工作日内将检测报告送到客户手中。外地客户克邮寄样品,邮寄方式请电话垂询。
注意事项:

收集样品前都必须有一个完整的计划,必须确定被检样品的稳定性。我们建议对样品尽早进行检测,对取样后当天进行检测的样品请及时储存再4℃备用。对需要周期取样的样品,请将样品及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因低温和室温直接影响蛋白质的稳定性,从而直接导致实验结果,所以应尽量避免反复冻融。待测放免样品的客户在取样前须向我公司销售人员索要说明书,具体操作注意事项请与我公司技术人员沟通。

公司简介

北京德元国际科技有限公司
2009年1月20日,北京德元国际科技有限公司成立。
2009年8月,德元国际机电设备部成立,自产产品作为援外产品出口。
2010年初,德元国际仪器产品部成立,研发生产科研设备产品,以电泳产品、超声波清洗器为主体。
2011年,德元国际试剂技术服务部成立,建立科研实验室,开展科研试剂及实验技术服务。
2012年,实施多品牌战略,仪器、试剂、耗材等
2013年,为满足客户需要,试剂产品全面升级。
2014年,机电设备部独立核算,德元国际以生产研发科研产品及科研试剂为主体。
2015年,以超声波清洗器为基础,开发样品处理设备,超声细胞粉碎仪,高通量研磨仪,相继研发成功!
2016年,通过资本运作,增加科研设备生产品种,冷冻系列产品,箱体系列产品,相继研发成功!
2018年,整合销售体系,统筹生产品种,形成样品处理家族产品、冷冻家族产品、箱体家族产品、电泳家族产品及相关试剂!

  样品处理家族:高通量组织研磨仪、超声波细胞破碎仪、核酸提取仪、移液器、超声波清洗器
  冷冻家族:  冻干机、冷阱
  箱体家族: 洁净工作台、雪花制冰机、层析柜、干燥箱、气溶胶喷雾器
  电泳家族: 水平电泳系统、垂直电泳系统、成像系统、酶标洗板、脱色摇床

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  精益生产  铸就精品!
  与您合作!



企业目标:成为全面的综合服务供应商
企业文化:厚德载物 开创新元

北京德元国际科技有限公司愿与世界各地有志于开拓国际市场的朋友携手共进,公司将永远遵循国际贸易法律法规和惯例,一如既往地遵循平等互利,重约守信的原则精诚合作,为德元走向世界,成为全面的综合服务供应商而不懈努力!

www.dorun.cc   德元国际   综合生产服务供应商!
 


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北京市丰台区丰台科学城
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