非整合型慢病毒包装
服务详情
非整合型慢病毒包装
一、非整合型慢病毒的背景
非整合型慢病毒是根据普通的慢病毒（Lent virus）载体改造而来，该载体可以将外源基因有效地转导到目的细胞上，可以在细胞质内达到瞬时表达的效果。可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，同时避免基因整合到宿主染色体造成的危害。具有低免疫性、低危害的特点。可以装载比AAV更大的DNA片段，插入片段可达8kb以上。可以轻易感染人、鼠、猴等绝大多数哺乳类细胞，是一个很好的替代传统DNA瞬时转染的基因导入方法，免除了常规DNA瞬时转染的条件摸索过程（包括转染试剂的选择及剂量比的摸索）。
非整合型慢病毒包装系统是百恩维掌握的核心技术，在国内外领先。百恩维技术团队已进行过多种目的基因的非整合型慢病毒包装，具有丰富的科研经验。现有客户包括研究所、医院、生物公司等。
二、非整合型慢病毒包装技术服务包含内容：
（一）非整合型慢病毒载体的构建：
l 将目的基因克隆构建到非整合型慢病毒载体，根据不同的研究需求，有用于基因过表达的非整合型慢病毒载体、用于RNAi的非整合型慢病毒载体、用于动物注射的非整合型慢病毒等；
（二）非整合型慢病毒包装：
- 得到的非整合型慢病毒载体，与辅助载体一起转染293T细胞进行包装；
- 将包装好的病毒超速离心收集；
- 将浓缩病毒进行滴定，滴定结果单位为TU/ml。
（三）非整合型慢病毒鉴定与质量控制：
- 测序鉴定
- 根据特定引物作RT-PCR鉴定
- 蛋白表达鉴定（根据客户要求）
三、非整合型慢病毒载体应用
l 动物体内注射
l 用于转染其他病毒难于转染的细胞，比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞
四、非整合型慢病毒的使用
l 表达
本产品感染细胞后，至少要培养24~48小时才能检测目的基因的表达。原因是慢病毒载体的基因组是RNA，需要反转录为DNA，并插入细胞染色体后才能表达。
l 感染细胞最佳MOI的测定
MOI（Multiplicity of Infection，感染复数）是指每个细胞感染的病毒数，通常
MOI越高，病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。对于分裂活跃的细胞
（如293细胞），MOI=1时，80%以上的细胞均表达目的基因。而对于非分裂细胞
，感染效率较低。我们建议通过比较不同MOI （比如0、1、5、10、50、100等），选择适合的MOI进行实验（可以考虑选用携带报告基因的病毒，比如Lenti-EGFP）。
五、如何避免非整合型慢病毒载体潜在的复制型和致癌的风险：
尽管非整合型慢病毒载体没有出现过任何意外，但为避免潜在的风险，操作者在实验中谨记如下原则！
所有操作均应尽量在BSL2级生物安全柜中进行，并佩戴一次性口罩和手套，尤其要避免病毒接触口、眼、鼻、耳、伤口等身体开放性区域，避免产生气溶胶，tip头一定要选择带有滤芯的。必须高度注意被污染的尖锐物品，包括针头、注射器、载玻片、移液管、毛细玻璃吸管和解剖刀。每次实验后，立即清理所有接触过病毒的器具，均应高压消毒再进行下一步处理。显微镜台、生物安全柜台面等使用后，用70%乙醇擦拭。意外洒落的含病毒的液体，用卫生纸吸干后，用0.6%次氯酸钠溶液浸泡被污染处1h。装盛非整合型慢病毒载体的实验用品，要单独放置，标示清楚。尽量避免意外洒落。对共用实验室的人员进行非整合型慢病毒安全培训或提示。
公司简介
百恩维生物科技有限公司（BioWit Technologies），是一家专业从事生物科技前沿技术研发的高新技术企业。为国内外众多药厂和科研机构提供病毒包装，蛋白表达，载体构建，干细胞培养基，转染试剂、细胞因子等产品及技术服务。公司专家团队曾在国内外知名学府和国际一流制药公司从事研发多年。
百恩维生物在深圳宝安高新奇工业园拥有世界一流的生物学实验室，包括多种先进的实验设备，以及一批经验丰富的技术人员。为客户提供最全面的病毒包装技术服务，除了常规病毒类型，还有非整合型慢病毒，9种血清型的腺相关病毒等极有特色的病毒包装服务。
百恩维为客户生产的干细胞培养基已经进入多项临床前试验阶段，产品质量控制指标达到临床使用样品要求。百恩维生物还提供数千种重组蛋白、以及转染试剂等产品。
百恩维生物建立起完善质量保证体系，所有产品均有卓越的质量保证。
百恩维生物已经拥有自主知识产权的产品2项，发明专利技术3项，并与国内外知名大学、中科院以及医科院等知名科研机构建立了良好的合作关系，在生物尖端技术方面能够持续创新。
百恩维生物将本着“专注、创新、诚信、和谐”的企业理念，为生物技术能够为人类健康造福而不懈追求！
●病毒包装技术服务：腺病毒、慢病毒、非整合型慢病毒、腺相关病毒、杆状病毒、逆转录病毒
● 载体构建：过表达载体、ShRNA表达载体、miRNA表达载体
● 蛋白表达与纯化：原核蛋白、真核蛋白、昆虫杆状病毒蛋白
● 干细胞培养基：干细胞无血清培养基、干细胞含血清培养基
●转染试剂：HET、Polyfectine、UES
●细胞因子：数千种细胞因子
售后服务
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