基于SILAC的定量蛋白质组学分析
技术简介
SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable isotope labeling with amino acidsin cell culture,SILAC),其基本原理是采用轻、重稳定同位素标记的赖氨酸/精氨酸进行细胞培养,细胞经传代培养6代后,细胞97%以上的蛋白质将被轻、重稳定同位素标记。等量混合标记稳定同位素标记的蛋白质,酶解后,进行质谱分析。SILAC标记技术是体内标记技术,且不影响细胞的功能,灵敏度高,广泛应用于比较蛋白质组学研究中。
技术优势
l 多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定,后续试验对样品的影响是一致的,减少了试验操作和仪器设备引入的实验误差。
l 体内标记技术,标记效率高达99%。
l 定量线性范围广,尤其对相对差异较大的蛋白定量精确。
l 可以对多种在DMEM、DMEM-F12,1640三种培养基中培养的细胞进行标记。
l 该技术属于体内标记,其标记效率不受裂解液成分的影响,标记效果稳定。
实验流程
送样标准
l 细胞能够在补充透析胎牛血清的DMEM, DMEM/F12, 1640培养基中培养。
l 景杰负责细胞培养:
请将细胞培养瓶灌满培养基,在4度环境中运送。
培养过程中需要的特殊试剂由客户提供,或由我们代购。
l 客户负责细胞培养:
客户在标记6代后,需要提供少量细胞进行标记效率检测。达到97%以上方可放大培养。
客户需提供50ul以上细胞沉淀。
l 从培养基中收集细胞后,请用4度预冷PBS洗涤三次,细胞沉淀-80度保存,干冰运送。
杭州景杰生物科技有限公司(PTMBiolabs,Inc.)是一家成立于2010年的创新型高新技术企业,座落于风景秀丽的钱塘江畔,是杭州市大力引进的海外高层次留学归国创业企业。公司现有员工50余人,其中具有海外名校留学背景的博士博士后10人,本科以上科技人员占90%以上。
公司是目前国内唯一以个体化医学-表观遗传学前沿研究领域为科学背景的,集研发、生产和服务于一体的创新型生物高科技企业。建有全球独一无二的“组学试剂+组学技术+组学分析“有机整合的”一站式“高端技术平台,致力于在个体化医学领域开展重大疫病的新型生物医学检测试剂、疾病诊断试剂、药物开发与筛选试剂的研发与生产;同时提供蛋白质修饰底物高通量鉴定、定量分析、生物标志物鉴定与药物靶点筛选的研发合作与技术支持。
基于公司雄厚的学术背景、领先的科研实力、良好的经营业绩以及广阔的发展前景,杭州景杰生物科技有限公司得到了各级政府的充分肯定和大力支持。先后被授予浙江省钱江人才、杭州市全球引才“521“计划、杭州市”115“引进国外智力计划等多项荣誉,并联合承担了”十二五“国家新药创制重大计划、国家自然科学基金等一批重大科研项目。
人类基因组的解码开创了以基因解析为特征的个体化医学新时代。然而,基因型与疾病表型的不相关性揭示出个体化医学的本质在于疾病最相关的功能分子----蛋白质。蛋白质修饰(ProteinPost-translationalModification,PTM)是蛋白质行使功能的最高级形态,是表观遗传现象的核心内容。因此,以蛋白质修饰-表观遗传为特征的生物医学研究是个体化医学领域的最前沿。
蛋白质修饰与表观遗传学是生物医学最前沿的研究领域,是21世纪生命科学与生物技术产业化的战略前沿和主要突破口。不久前,国际人类蛋白质组组织宣布全面启动“国际人类蛋白质组计划(HPP)”,其实施势必全面带动科学技术及生物产业的发展。在国际上,以蛋白质修饰与表观遗传为特征的靶向性抗肿瘤药物开发是个体化医学的核心内容,是跨国制药公司与著名药物研发中心争相投入的领域。
个体化医学和蛋白质组学是我国重点支持的科学研究与科技产业发展方向,2006年发布的《国家中长期科学和技术发展规划纲要(2006—2020)》明确宣示在国家政策层面上重点支持个体化医学和蛋白质组学研究与产业化转化。2011年科技部《关于印发医学科技发展“十二五”规划的通知》(国科发计[2011]552号)明确指出蛋白质组学技术和个体化诊疗技术为“十二五”发展重点。中国健康促进基金会和国家发改委等五部委也先后启动了个体化医学专项资助项目(中国健康促进基金会[2011]002号)和蛋白类生物药和疫苗发展专项(发改办高技[2012]3420号)。
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