实验案例： YYYY细胞在XXXX基因干扰后的增殖及侵袭能力实验

第一部分：实验细胞筛选

一、免疫荧光实验

实验试剂 ：PBS(磷酸盐缓冲液pH7.4)，非免疫山羊血清，Triton X-100，BSA抗体稀释液，XXXX蛋白一抗 (1:100)，二抗Alexa Fluor 555 goat anti-rabbit IgG (H+L) *2 mg/mL*(A21428)
免疫荧光（IF）染色：倒出细胞培养液，PBS冲洗三次；2-4%甲醛固定15分钟；1×PBS缓冲液（0.01 M，pH7.4）洗涤3次，每次5分钟；滴加非免疫山羊血清（内含0.3%Triton X-100）封闭液,覆盖液面2-3mm,室温放置60min，甩去多余液体；滴加一抗plscr1 50μL（1:100），4℃过夜；PBS洗3次，每次5分钟；滴加荧光标记的上述二抗50μL（1：200），室温 60分钟；PBS洗3次各5min；荧光显微镜下观察、拍照，每指标照相2套图像。
IF染色结果（400倍）:通过荧光染色可以分析出，XXXX蛋白在YYYY细胞中表达量最突出。
YYYY细胞 

     
AAAA细胞   

     
BBBB细胞 

      
CCCC细胞

二、RT-PCR实验

实验材料：细胞样品4份，分组编号（见图片标示）
试剂：Trizol Reagent,Invitrogen  Cat.NO.15596-026；ReverTra Ace-α-TM  First Strand cDNA Synthesis Kit ,TOYOBO #FSK-100；PCR Master Mix（2x） Fermentas # K0172；DNA Marker DL2，000， TaKaRa D501A；0.1% DEPC水、氯仿（分析纯）、异丙醇（分析纯）75%乙醇；AGAROSE(琼脂糖)  AMRESCO，K499；10×DNA上样缓冲液, 美国ProMab,SJ-R2008523；0.5mg/ml EB 溶液，实验室常备；1×TBE, 实验室常备，配方参照《分子克隆实验指南 第二版》
仪器：PCR仪,ABI9600；电泳仪，北京六一仪器公司，DYCP-31DN型；高速离心机，湘仪H1650-W； 紫外分光光度计，上海江仪仪器有限公司，UV-7502C(751)；成像系统，柯达紫外显相系统 400W像素
引物资料：

Homo- XXXX-F    5- cacccatgtctaccaaagtt -3，Homo- XXXX-R    5- ctctcaaaattccagtccag -3，片段长度: 175bp
Homo-GAPDH-F   5-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3，Homo-GAPDH-R   5-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3，片段长度   450bp

具体实验步骤以及详细实验信息请参阅以下链接：

http://www.jiamay.net/vshow_28_1858.html

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