Tet诱导表达载体构建技术服务
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Tet诱导表达载体构建技术服务
目前，已经研究开发出了多种Tet调控表达载体系统，主要分为Tet-on系统和Tet-off系统。在进行基因功能研究中，多用Tet-on系统，而Tet-off系统基本弃用。
百恩维生物能为您提供Tet-on诱导表达系统的载体构建服务，并且有多种表达载体供您选择：
1、常规的真核表达的两质粒Tet-on系统。
2、百恩维生物自主开发的病毒（慢病毒、腺病毒、腺相关病毒）单质粒Tet-on系统，构建好的质粒可直接用于真核表达，也可包装相应的病毒后使用，感染效率更高，目标基因诱导表达水平更强。
3、病毒单质粒Tet-on系统不仅可以表达目标基因，也可用于表达ShRNA。
4、百恩维生物自主开发的病毒单质粒Tet-on系统，含有GFP标记基因、药筛标记（Neomycin、Puromycin），可用于构建稳转细胞株。
★ Tet诱导表达原理
四环素（Tet）诱导调控表达系统的基本原理是由诱导药物（如Tet）改变调控蛋白质的构象，从而控制目标蛋白质的表达。最初的Tet诱导调控基因表达系统是以大肠杆菌Tn10转座子上Tet抗性操纵子为基础而建立的。Tet阻遏蛋白(Tet repressor protein, TetR)与Tet操纵基因(Tet operator, TetO)DNA序列有特异的亲和能力，当细胞内无Tet存在时，TetR会与TetO结合，从而阻断下游的抗性基因表达。当有Tet存在时，药物使TetR的构象发生改变，导致TetR与TetO分离，从而引起抗性基因的抑制解除，抗性蛋白表达使细菌产生耐药性。
利用TetR和TetO特异结合的特性，目前开发改造了多种类型的Tet调控表达载体系统，但根据其表达特点可以归为两大类：抑制型系统Tet-off和激活型系统Tet-on。
Tet-off调控系统
最早的Tet-off基因调控表达系统由调节表达载体和反应表达载体组成。调节表达载体包含一个由人巨细胞病毒早期启动子(PhCMV)启动Tet转录活化因子(tetracycline transcrip-tional activator, tTA)，tTA由TetR与单纯疱疹病毒(HSV)VP16蛋白质C端的一段转录激活区融合而成。反应表达载体由Tet应答元件(Tet-responsive element, TRE)、最小CMV启动子(minimal CMV promoter, Pmin CMV)及目的基因组成。目的基因位于TRE和PminCMV的下游；TRE为7次重复的TetO序列。PminCMV缺失增强子，因此在tTA未结合到TRE时，目的基因不表达；相反，当tTA结合到TRE时，VP16会使PminCMV活化从而使基因表达。当细胞内无Tet或其衍生物强力霉素(doxcycline, Dox)的存在时，tTA可与TRE结合，打开基因表达；而当Tet或Dox存在时，它们可使tTA中的TetR改变构象，则tTA将从TRE上脱落下来，使TRE中的PminCMV处于非激活状态，从而使基因表达处于关闭状态。
Tet-on调控系统
Tet-on调控系统与Tet-off调控系统的区别在于其调节蛋白质为反义Tet转录活化因子(reverse tetracy-cline transcriptional activator, rtTA)。rtTA是由反义TetR(reverse TetR, rTetR)与VP16的转录活化区域融合而成。rTetR由TetR中的4个氨基酸发生突变而衍生而来的。rTetR的表型与TetR相反，在无Dox时，其不能结合TRE，导致基因表达关闭；而在有Dox存在时，其会结合在TRE上，导致基因表达开放。（详见图4）
Tet诱导调控表达系统的优点
具有低本底与高诱导倍数的特点，无诱导时目的基因表达水平低，诱导时其表达水平增高，最高诱导倍数可达10,000倍。
诱导所需的时间短，Dox为脂溶性，容易渗透细胞和组织，在加入诱导剂30分钟内即可检测到目的基因的表达。
该诱导系统是一种可逆系统，当去除诱导剂一定时间后可使该系统关闭，之后仍可通过加入诱导剂重新开启。
诱导药物为Tet或其衍生物(如Dox)，安全。Tet作为一种抗生素已被人们应用了很长时间，已被广泛作为抗生素使用，是对人体较为安全的一种药物。
Tet诱导调控表达系统的应用
Tet系统被广泛应用于动物体内和体外（细胞水平）基因功能、蛋白质功能、以及mRNA功能的研究，也用于体外基因治疗的研究。
比如该系统已成功的用于胰岛细胞、肺组织、脑组织以及帕金森病、软骨病等基因治疗实验研究中，目前该系统也用于诱导多能干细胞(induced luripotent stem cell, iPS cell)技术中的重编程因子表达的调控。
相关技术服务
基因过表达载体构建
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公司简介
百恩维生物科技有限公司（BioWit Technologies），是一家专业从事生物科技前沿技术研发的高新技术企业。为国内外众多药厂和科研机构提供病毒包装，蛋白表达，载体构建，干细胞培养基，转染试剂、细胞因子等产品及技术服务。公司专家团队曾在国内外知名学府和国际一流制药公司从事研发多年。
百恩维生物在深圳宝安高新奇工业园拥有世界一流的生物学实验室，包括多种先进的实验设备，以及一批经验丰富的技术人员。为客户提供最全面的病毒包装技术服务，除了常规病毒类型，还有非整合型慢病毒，9种血清型的腺相关病毒等极有特色的病毒包装服务。
百恩维为客户生产的干细胞培养基已经进入多项临床前试验阶段，产品质量控制指标达到临床使用样品要求。百恩维生物还提供数千种重组蛋白、以及转染试剂等产品。
百恩维生物建立起完善质量保证体系，所有产品均有卓越的质量保证。
百恩维生物已经拥有自主知识产权的产品2项，发明专利技术3项，并与国内外知名大学、中科院以及医科院等知名科研机构建立了良好的合作关系，在生物尖端技术方面能够持续创新。
百恩维生物将本着“专注、创新、诚信、和谐”的企业理念，为生物技术能够为人类健康造福而不懈追求！
●病毒包装技术服务：腺病毒、慢病毒、非整合型慢病毒、腺相关病毒、杆状病毒、逆转录病毒
● 载体构建：过表达载体、ShRNA表达载体、miRNA表达载体
● 蛋白表达与纯化：原核蛋白、真核蛋白、昆虫杆状病毒蛋白
● 干细胞培养基：干细胞无血清培养基、干细胞含血清培养基
●转染试剂：HET、Polyfectine、UES
●细胞因子：数千种细胞因子
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