基因定点敲除与整合
基因定点敲除与整合就是通过TALEN技术定点敲除基因组上的某一确定的目的基因,或者导入外源的同源序列,通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性,是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。
TALEN的中文名为转录激活因子样效应物核酸酶,是基因组编辑核酸酶三大类之一。TALEN是一种可靶向特异DNA序列的酶,它借助于TAL效应子一种由植物细菌分泌的天然蛋白来识别特异性DNA碱基对。TAL效应子可被设计识别和结合所有的目的DNA序列。对TAL效应子附加一个核酸酶就生成了TALENs。TAL效应核酸酶可与DNA结合并在特异位点对DNA链进行切割,进而在该位点进行DNA操作,如Knock-out、Knock-in或点突变。
TALEN技术优势:
1.无基因序列、细胞、物种限制;
2.TALE的核酸识别单元与A、G、C、T具有恒定的对应关系。实验设计简单准确、实验周期短、成本低;
3.成功率几乎可达100%。毒性低,脱靶率低,目前尚未发现明显脱靶效应;
4.克服了常规的ZFN方法不能识别任意目标基因序列,以及识别序列经常受上下游序列影响等问题,并且具有比ZFN更高的打靶活性;
5.TALEN技术是在DNA水平上进行的基因敲除,彻底解决了RNA干扰技术仅在mRNA水平上Knock down的瓶颈,且TALEN技术已经成为未来基因组修饰的趋势!
服务说明:
服务编号 |
服务内容 |
说明 |
周期 |
价格 |
SM047
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TALEN序列 |
针对同一目标基因设计合成3-6对TALEN序列。 |
5工作日 |
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SM048
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TALEN质粒 |
根据DNA序列组装TALEN质粒,用于细胞内DNA切断。 提供一个或多个质粒和测序结果。 |
10工作日 |
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SM049
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TALEN活性检测 |
检测构建好的TALEN质粒活性(报告基因方法或细胞系内直接检测) |
15工作日 |
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SM050
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细胞系TALEN定点整合 |
通过TALEN进行DNA切断和同源重组,提供两个目标基因变异的细胞系。 |
8周 |
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SM051
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模式生物基因敲除或整合 |
如小、大鼠、猪、斑马鱼、线虫、果蝇、植物等模式生物的基因敲除或同源重组。通过TALEN进行DNA切断和修复,提供至少两只目标基因靶点变异的动值物体。 |
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技术服务列表:
1.分子生物学:基因合成、引物合成、基因测序、核酸提取、载体构建、质粒抽提、PCR、Q-PCR、RT-PCR、定点突变、定点整合、定点敲除、甲基化检测、SNP检测等等
2.蛋白工程:原核、酵母、昆虫、哺乳动物蛋白表达系统
3.病毒包装:腺病毒、慢病毒
4.抗体工程:WB、ELISA、IP、IF、IHC、FACS、Confocal、磁珠分选、病理染色
5.细胞工程:细胞培养、细胞膜制备、稳定细胞株构建、细胞RNAi技术、细胞表型分析(凋亡、增殖、周期、迁移、侵袭、修复、克隆形成)
6.药物研发:GPCR、Kinase、Protease、Ionchannel、Nuclearreceptor
7.数据统计与分析
8.论文翻译与润色
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