分子与细胞

腺病毒包装

基本信息
服务名称:
腺病毒包装
英文名称:
adenovirus
参考报价:
总点击数:
1180
更新日期:
2014-04-19
服务类别:

服务详情

腺病毒包装 
腺病毒是一种线性双链DNA病毒,由于其具有宿主范围广、可感染分裂和非分裂细胞、高滴度制备、外源基因装载容量大等优点,重组腺病毒已越来越广泛地被应用于基础研究和临床试验中,并成为世界上最常用的基因治疗载体之一。

腺病毒包装的优点:

1、可感染的细胞种类多,宿主广泛;

2、感染效率高,特别适合质粒载体转染效率低的细胞,如原代细胞、神经细胞等,且目的蛋白表达水平高;

3、可包装大片段的外源基因,高达10kb;

4、不整合到细胞染色体中,生物安全性高。

腺病毒包装技术主要原理是将目的片段克隆到腺病毒表达载体上,表达载体和包装质粒通过重组导入腺病毒包装细胞进行包装,包装好的病毒进一步进行扩增和滴度测定。

科佰生物拥有丰富的病毒包装经验,成功为很多客户包装出需要的病毒。公司提供2种较常用的系统:AdEasy、AdMAX。

 

Ad-Easy系统:

AdEasy包装系统主要的特点是利用Cre/loxP系统在大肠杆菌(BJ5183)中完成外源基因插入腺病毒基因组的过程,获得环状的重组腺病毒基因组,并且具有在细菌中复制的必需元件。将重组腺病毒基因组酶切线性化后转染HEK293细胞,避免了双质粒共转染得到重组腺病毒。

使用这个系统需要注意以下问题:

1.要用能表达Cre重组酶的特定的大肠杆菌,建议建立菌种库以免细菌发生变化;

2.由于重组是在细菌中发生的,微小的基因组变化不易发现;

3.要获得高品质的重组腺病毒毒种(高病毒产量、高目的基因表达)应挑选多个重组腺病毒质粒,分别转染HEK293细胞,获得多个重组病毒来筛选。

可根据不同的研究需求构建腺病毒穿梭载体,如用于RNAi的腺病毒载体、用于基因过表达的腺病毒载体、用于启动子活性研究的腺病毒载体等

 

AdMAX系统:

AdMax包装系统是通过Cre/loxP 获得重组病毒,这个过程发生在HEK293细胞中,从而避免在细菌中重组。将克隆了外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的包装质粒共转染HEK293细胞,利用Cre/loxP系统的作用实现重组,产生重组腺病毒。这个系统有多种优势,包括操作简便、重组效率高、获得的病毒产率高、目的基因的表达水平高(因为mCMV启动子比hCMV启动子强若干倍)等。

可根据不同的研究需求构建腺病毒穿梭载体,如用于RNAi的腺病毒载体、用于基因过表达的腺病毒载体、用于启动子活性研究的腺病毒载体等

 

技术流程:

1.获得目的基因序列;

2.构建病毒表达载体质粒;

3.表达载体质粒和包装质粒重组;

4.感染HEK293,包装出病毒;

5.病毒扩增、浓缩;

6.滴度测定。
 

服务说明:

1.客户提供目的基因的序列,如果提供模板,请告知载体、酶切稳点等信息;

2.默认使用AdEasy系统,有明确要求请告知;

3.序列过长可能影响病毒滴度;

4.目的蛋白的功能验证另外收费。

提交的产品和资料:

1.实验报告;

2.提供至少1ml滴度>10^10PFU/ml的病毒,特殊基因除外;

订购方法:
1、询价及订购请填写"询价单",并发送邮件至sales@cobioer.com
2、根据客户信息,我们会上门取样品
3、如需帮助,请发送邮件至tech@cobioer.com或拨打025-86880024,科佰生物的技术支持将竭诚为您服务。
公司简介

科佰生物科技有限公司是一家专业提供生命科学研究服务外包,生物试剂、耗材销售的综合型公司。公司在多年的发展历程中,逐步建立起分子生物学、蛋白工程、病毒包装、抗体工程、细胞工程、药物研发等一系列平台,与上海张江药谷、苏州纳米园建立了稳定的合作关系,同时公司与国内外知名产品供应商签署贸易协议,成为一线品牌的代理商、经销商。
为节约客户的时间,提升科研服务的质量,公司出资筹建现货产品库,包括ORF库、载体库、抗体库、细胞库、病毒库,已经建成1000+的ORF库,全部经过测序验证;80+载体库,全部经过实验验证;300+抗体库,全部经过预实验验证;200+细胞库,全部来源于ATCC/ECACC等正规机构;100+的病毒库,全部现货可用。
公司拥有全球领先的硬件设备,包括荧光定量PCR仪、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、高通量筛选仪、高内涵筛选仪、液体工作站、HPLC、质谱、akata、超速离心机、冷冻离心机、多款多功能酶标仪、洗板机、生物安全柜、CO2培养箱等等,基于如此强大的平台,充分保证了科研数据的质量,进而保证了论文的质量。
公司的团队主要由国内外知名大学毕业的硕士、博士组成,具备化学、生物学、医学、药学等相关专业背景,大部份员工有多年在CRO公司或者国内外药企工作的经验,具有更专业的生命科学背景和更强烈的客户服务意识。
公司秉承“客户第一”的理念,旨在全力为客户排忧解难,与客户发展长期的合作关系,做到让客户满意,做到公司利益和客户利益相统一。同时公司重视人才培养,除了专业能力的不断培养外,更重要的是培养员工的使命感及开拓创新精神,只有有主人翁意识的员工,只有不断创新的员工,公司才能生存,才能发展。
公司立足现有的技术优势、客户优势、成本优势,通过公司全体员工的一致努力,立志成为一流的科研外包服务企业和自主专利研发产品的生产企业,进而能在药物研发上有所建树。
技术服务列表:
1.分子生物学:基因合成、引物合成、基因测序、核酸提取、载体构建、质粒抽提、PCR、Q-PCR、RT-PCR、定点突变、定点整合、定点敲除、甲基化检测、SNP检测等等
2.蛋白工程:原核、酵母、昆虫、哺乳动物蛋白表达系统
3.病毒包装:腺病毒、慢病毒
4.抗体工程:WB、ELISA、IP、IF、IHC、FACS、Confocal、磁珠分选、病理染色
5.细胞工程:细胞培养、细胞膜制备、稳定细胞株构建、细胞RNAi技术、细胞表型分析(凋亡、增殖、周期、迁移、侵袭、修复、克隆形成)
6.药物研发:GPCR、Kinase、Protease、Ionchannel、Nuclearreceptor
7.数据统计与分析
8.论文翻译与润色
产品列表:
1.代理、经销国内外一线品牌产品
2.自主研发专利产品


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