mRNA实时定量PCR技术服务
mRNA实时定量PCR技术服务
实时荧光定量PCR技术即是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物检测定量产生的偏差,提高实验的重复性。该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化、比较不同组织的mRNA表达差异、验证基因芯片和siRNA干扰的实验结果。
康成生物为您提供的一站式mRNA实时荧光定量PCR技术服务,您只需要提供保存完好的组织或细胞标本,本公司专业的技术服务人员就可替您完成mRNA实时定量PCR实验操作和数据分析,提供给您完整的实验报告,为您节省大量的时间和精力。全部实验皆使用进口试剂完成;定量PCR仪器为美国应用生物系统公司生产的荧光定量PCR仪ABI PRISM 7900、Corbett Research公司生产的离心式实时定量PCR仪Rotor-Gene 3000。 |
康成生物mRNA实时定量PCR技术服务流程
1. 设计并合成Realtime PCR引物
2. 引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶进行含SG(SYBR® Green)的PCR反应的优化。
3. RNA抽提
a. 若实验对象为组织样品,取适量(50-100mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml的RNA抽提试剂Trizol(Invitrogen),匀浆后抽提RNA。
b. 若实验对象为细胞样品,每份样品取1×106~1×107细胞,完全吸去培养液后加1ml的RNA抽提试剂Trizol(Invitrogen),裂解后抽提RNA。
4. RNA质量检测
a. 紫外吸收测定法测定RNA在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,以计算其浓度并评估RNA纯度。
b. 使用甲醛电泳试剂(ambion)进行变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完整性。
5. cDNA合成
按照逆转录酶(Invitrogen或Promega)5. 使用说明将样品RNA逆转录为cDNA。
6. 制备标准曲线样品(可选)
进行相对定量,需要先将样品的目的基因以及管家基因进行PCR扩增, 其产物进行梯度稀释用于做标准曲线。
7. 实时定量PCR
标准曲线样品和待测样品分别加入到含SG的RealTime PCR反应液中(其中TaqBead热启动聚合酶来自Promega公司),进行RealTime PCR扩增和检测
8. 数据分析
检测结果进行标准曲线分析,以对待测样品的目的基因进行定量。相对定量实验需要进一步用样品的目的基因测得值除以管家基因测得值以校正误差,所得结果代表某样品的目的基因相对含量。9. 提供实验报告:包括详细的实验方法及实时荧光定量PCR实验结果及相关图表。
上海康成生物工程有限公司
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上海康成生物工程有限公司自2002年起专注于生物科研技术服务,是国内最早一批专业提供生命科学前沿研究技术服务的高科技企业。为进一步拓展在医学科研服务领域业务的深度和广度,向多谱领域发展,重塑品牌 Aksomics(数谱生物)。Aksomics全面整合公司在非编码RNA(lncRNA、circRNA、small RNA等)、表观遗传学、蛋白组学等检测方向的核心技术,依靠自身优秀的研发、技术、营销和服务团队,凭借国际领先的技术平台和高标准的质控体系,形成了涵盖表观基因组学、转录组学、蛋白质组学及代谢组学等各个研究领域的一站式技术平台。
【表观基因组学】 DNA甲基化芯片、DNA羟甲基化芯片、染色质免疫共沉淀芯片、DNA甲基化测序、DNA羟甲基化测序、染色质免疫共沉淀测序、MeDIP-PCR、hMeDIP-PCR、ChIP-PCR等
【转录组学】LncRNA芯片、LncPath™芯片、环状RNA芯片、T-UCR芯片、microRNA芯片、piRNA芯片、全基因组表达谱芯片、RNA测序、RNA m6A甲基化测序、small RNAs测序系列(microRNA测序、tRF&tiRNA测序、snoRNA测序、piRNA测序等)、LC-MS tRNA修饰检测、 nrStar™ ncRNA PCR芯片(tRF&tiRNA,tRNA,snoRNA,Functional LncRNA)、miRStar™癌症特异性microRNA PCR芯片、NuRNATM mRNA PCR芯片、功能分类PCR芯片、LncRNA实时定量PCR、环状RNA实时定量PCR、tRF&tiRNA实时定量PCR、microRNA实时定量PCR、mRNA实时定量PCR
【蛋白组学平台】TMT标记定量蛋白组学服务、Lable-free定量蛋白组学服务、磷酸化修饰蛋白组学服务、泛素化修饰蛋白组学服务、N-糖基化修饰蛋白组学服务、乙酰化修饰蛋白组学服务、蛋白-蛋白相互作用组学
【代谢组学】靶向代谢组学、非靶向代谢组学
【外泌体组学】外泌体转录组学、外泌体蛋白质组学、外泌体代谢组学
康成生物为Agilent、Arraystar、Exiqon、Illumina、Qiagen、Thermo Fisher等国际知名品牌提供技术服务。康成客户采用各类技术服务发表的SCI论文已超560篇。康成生物将持续聚焦生命科学发展的挑战,提供有竞争力的产品和服务,持续为客户创造最大价值。
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