circRNA是目前生命科学领域新兴的研究热点分子之一。区别于传统的线性RNA，circRNA具有独特的闭合环状结构，使得其对核酸酶不敏感，所以比线性RNA更为稳定，非常适合作为临床诊断标志物（biomarker）。近期研究表明，circRNA主要通过吸附miRNA抑制后者对相应靶基因的调控，称之为竞争性内源RNA（ceRNA），而与疾病相关联miRNA的相互作用说明circRNA对疾病的调控起着非常重要的功能。

circRNA实时定量PCR技术服务流程
1. 独特的引物设计
    由于circRNA独特的闭合环状结构，在进行实时定量PCR检测的时候需要更为特异的引物设计；针对circRNA特异的back splicing site，引物设计在该位点两侧（如下图），即“外向引物”（区别于线性RNA的内向引物）。

 2. 样品RNA抽提

    a.组织样本：取适量（50-100mg）新鲜组织或正确保存的组织样本，匀浆后用Trizol试剂抽提RNA。

    b.细胞样本：取1×106-1×107细胞，PBS清洗细胞，吸去PBS后用Trizol试剂抽提RNA。

3. RNA质量检测

    a.紫外线吸收测定法测定RNA在波长260nm和280nm的吸收值，获得RNA的浓度及并通过  A260/A230及A260/A280的吸收比值判定RNA的纯度；

    b.甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。

4. 逆转录合成cDNA

    利用random primer进行RT反应，合成cDNA。

5. 实时定量PCR

    以合成的cDNA作为模版进行实时定量PCR扩增；同时检测每个样本中内参基因的表达量，校正上样误差。

6. 分析结果、提供实验报告

    分析实时定量PCR结果，提供实验报告，包括详细的实验方法、实时定量PCR实验数据和图表。

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上海康成生物工程有限公司自2002年起专注于生物科研技术服务，是国内最早一批专业提供生命科学前沿研究技术服务的高科技企业。为进一步拓展在医学科研服务领域业务的深度和广度，向多谱领域发展，重塑品牌 Aksomics（数谱生物）。Aksomics全面整合公司在非编码RNA（lncRNA、circRNA、small RNA等）、表观遗传学、蛋白组学等检测方向的核心技术，依靠自身优秀的研发、技术、营销和服务团队，凭借国际领先的技术平台和高标准的质控体系，形成了涵盖表观基因组学、转录组学、蛋白质组学及代谢组学等各个研究领域的一站式技术平台。

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