miRNA靶基因预测与检测
miRNA靶基因预测与检测
简介
miRNAs与靶基因的3’UTR结合后，一般功能主要表现为抑制mRNA的翻译，为了检测其效果，我们可以用Western Blot的方法检测靶蛋白的表达水平，也可以用qRT-PCR进行检测靶标基因的表达。但是这两种方式都不能有效地说明是miRNAs直接起作用的结果。因此为了检测miRNA靶标的有效性，构建Sensor reporter并进行活性检测，才是对miRNAs与靶基因3’UTR的关系作出准确判断的方法。
服务优势
（1）采用Promega公司特有psiCHECK质粒；
（2）所采用的Luciferase双荧光报告系统，可以获得宽泛的线性定量范围与极高的灵敏度；
（3）采用瞬时转染技术，操作简便、快速，周期短，适用于绝大多数细胞类型。
服务流程
（1）PCR扩增靶基因的3’UTR，或直接合成结合位点序列；
（2）将上述确定的靶基因DNA片段克隆至报告基因载体psiCHECK质粒；
（3）克隆miRNA表达载体；
（4）将报告载体与miRNA表达载体共转染293T细胞；
（5）多功能酶标仪检测报告基因的表达水平；
（6）数据分析，整理提交客户原始数据及项目报告；
注：为了实验的严谨性，可加入靶标基因3’UTR区microRNA预测结合区域的突变体作为对照，进一步说明问题。
附：psiCHECK质粒图谱
汉恒生物实例：
汉恒生物通过合成mimics，构建可能靶基因的3’UTR报告基因系统成功验证miRNA与靶基因的关系。
汉恒生物科技（上海）有限公司[简称汉恒生物]是一家专门从事生物技术服务和产品销售与研发的高科技企业，公司专注于为广大科研工作者提供腺病毒、慢病毒、逆转录病毒包装、细胞稳定株筛选、siRNA设计和microRNA研究服务。汉恒生物科技（上海）有限公司[简称汉恒生物]自成立之日起，就以“为客户提供最优质的服务和品质卓越的产品”为宗旨，凭借国际先进的实验设备和经验丰富的实验技术人员，获得了中国顶级病毒包装供应商的美誉，是全国唯一一家可以提供病毒现货的公司。汉恒生物科技（上海）有限公司[简称汉恒生物]提供的产品和服务具有产品质量好、滴度高、服务优及周期短等特点。
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