CRISPR-CAS9基因编辑
CRISPR-CAS9基因编辑 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
基因编辑技术 CRISPR-Cas9 是近年兴起的用于靶向基因组特定位置,进行DNA修饰的重要工具。 研究发现CRISPR是细菌为了应对病毒的攻击而演化而来的获得性免疫防御机制。具体来说,在CRISPR和Cas9的作用下,经由小RNA分子的引导,靶向并沉默入侵者遗传物质核酸的关键部分。在该系统中,crRNA(CRISPR-derived RNA)与tracrRNA(trans-activating RNA)结合形成的复合物能特异性识别靶基因序列,并引导Cas9核酸内切酶在靶定位点剪切双链DNA,随后,细胞的非同源末端连接修复机制(NHEJ)重新连接断裂处的基因组DNA,并引入插入或缺失突变。另外也可以提供一个外源双链供体DNA片段(Donor)通过同源重组(HR)整合进断裂处的基因组,从而达到对基因组DNA进行修饰的目的。 目前,CRISPR-Cas9系统的高效基因组编辑功能已被应用于多种生物,包括小鼠、大鼠、斑马鱼、秀丽隐杆线虫,也包含多种细菌和植物,甚至在人体上也有应用。
基因编辑技术优势 1、操作简单,靶向精确性高。 2、可实现对靶基因特定位点定点敲除。 3、可同时对多个靶基因进行敲除。 4、可应用于任何物种。 5、CRISPR-Cas9系统是由RNA调控的对DNA的修饰,可稳定遗传。
普通载体、Cas9/Donor腺病毒颗粒、Cas9慢病毒颗粒 定制gRNA和HR供体载体 基因敲除细胞株 Gene Knock-Out,Knock-in或Gene标记 1、物种、基因名称或者基因ID; 2、提供靶细胞。
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