技术原理与实验步骤

基因定点突变指在基因核苷酸序列特定位点插入或缺失核苷酸，是蛋白功能改造的常用方法。目前基因定点突变的方法主要有PCR介导的定点突变、寡核苷酸引物介导的定点突变、盒式突变等。

PCR介导的定点突变技术原理是根据突变位点设计4条引物，其中两条引物带有突变位点，后通过3步PCR后即可得到带有突变位点的目的DNA片段。具有周期短、成功率高、不受酶切位点限制等优点，是目前使用最普遍的定点突变方法。

寡核苷酸引物介导的定点突变原理是将待突变基因克隆到质粒载体上，在突变位点设计引物，提取插入了目的基因片段的质粒并制备成单链DNA，用突变引物做高保真PCR产生野生型、突变型的同源双链DNA分子，这些DNA分子含有nick位点，转化到感受态细胞后可经大肠杆菌修复。由于野生型质粒一般来源于大肠杆菌，被甲基化修饰，会被DpnI酶切，经DpnI处理后选择性的保留了突变型质粒，转化到感受态细胞后可得到含有突变质粒的克隆，可用于DNA进行点突变、插入及缺失突变。

服务流程

• 客户提供基因信息、载体信息及要引入突变的位置等
• 设计引物并进行PCR，PCR产物连接到载体上，挑取菌落，提取质粒并测序
• 发送产品：构建好的阳性克隆子菌液、质粒，附带相关引物、PCR电泳图、测序结果等

服务周期：1-2周

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