技术原理与实验步骤

采用噬菌体介导的同源重组进行基因敲除：首先构建同源交换位点（AES），随后将其整合到结核分枝杆菌噬菌体基因组中，获得噬菌粒（phasmid）；将噬菌粒导入耻垢分枝杆菌，获得整合有同源交换位点的重组噬菌体，经体外扩增获得高滴度的重组噬菌体，对结核分枝杆菌进行转染；将转染后的结核分枝杆菌涂布到含潮霉素抗性的固体培养基上，37℃培养4-5周，挑取单克隆，通过PCR等方式进行验证。

服务流程

• 客户提供结核菌敲除基因编号
• 收到客户信息后构建同源臂及包装噬菌体
• 噬菌体感染结核菌并验证阳性克隆
• 提交结核基因敲除菌菌液及实验相关的引物、测序结果等信息

服务周期: 4-6个月

参考文献

1. Specialized transduction: an efficient method for generating marked and unmarked targeted gene disruptions in Mycobacterium tuberculosis, M. bovis BCG and M. smegmatis. Stoyan Bardarov et al., Microbiology, 2002, 148: p3007-3017.

2. Specialized transduction designed for precise high-throughput unmarked deletions in Mycobacterium tuberculosis. Jain P, Hsu T et al., mBio, 2014, 5(3): e01245-14.

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