核酸提取纯化|DNA提取|RNA提取
核酸具有贮存和传递遗传信息等重要生物功能,是分子生物学研究的主要对象。采用常规吸附柱法抽提样本中的DNA、RNA,为下游实验提供高纯度和高浓度的模板。
DNA提取方法:对基因组DNA的提取方法主要有 CTAB,SDS和其他如玻璃珠法,酶法等。质粒DNA的提取主要有碱裂解法和煮沸法;线粒体,叶绿体DNA的提取主要有差速离心结合SDS法。
RNA提取方法:异硫氰酸胍/苯酚法。基本实验原理:细胞在变性异硫氰酸胍作用下裂解,核酸释放。DNA和RNA在特定pH下溶解度不同而分别于体系的中间相与水相,得以分离。进行有机溶剂抽提,沉淀,得到纯净RNA。
样品类型及样品需求
动物组织:单个样品>0.1g,2mlEP管或冻存管装,不要过量;样本应尽量新鲜,如不能立即提取蛋白或核酸,应液氮速冻后冻存于-80℃或更低,冻存样本避免反复冻融以致降解
种子样本:去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本,单个样品>0.2g
贴壁/悬浮细胞:1. 总RNA或蛋白:106cell/指标、浆/核RNA或蛋白:107cell/指标、线粒体RNA或蛋白:2*107 cell/指标,样本尽量新鲜,细胞收取后直接加Trizol(QPCR检测)或直接冻存于-80℃
2. 若细胞处理(加药、转染、感染)后状态差应酌情加大收样量
全血/血清样品:用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml; -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol。
石蜡包埋样品:由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块,有效厚度大于 0.1cm; 新鲜的 FFPE 组织切片,每片厚度不超过 10μm,2~8 张,表面积不超过 250mm2。
抗体样本
1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体;
2. 按抗体说明书要求寄送,尽量避免分装;如分装,确保量足够进行实验,并提供抗体说明书。
3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,抗体的量应大于实验所需的量。
引物:干粉,≥1OD,如进行预实验,每个基因至少提供两对引物, 附带公司引物合成单。
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