细胞功能研究平台
基本信息
服务详情
细胞培养和处理
细胞培养
常规细胞2D培养、3D培养及细胞共培养。
细胞转染
包括质粒转染、siRNA转染等。并可以结合qPCR和Western Blot实验对转染后相关基因的表达进行鉴定，后续可以对转染成功的细胞进行细胞功能检测。
细胞药物处理
确定药物或化合物的IC50浓度及作用时间。
细胞培养
常规细胞2D培养、3D培养及细胞共培养。
细胞转染
包括质粒转染、siRNA转染等。并可以结合qPCR和Western Blot实验对转染后相关基因的表达进行鉴定，后续可以对转染成功的细胞进行细胞功能检测。
细胞药物处理
确定药物或化合物的IC50浓度及作用时间。
细胞功能
细胞增殖
· CCK8法
CCK8法原理是WST-8四唑盐（2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium）能被活细胞内的脱氢酶还原成橙色甲臜染料，然后测定450 nm下的吸光值，生成的甲臜的量与活细胞数量成正比。CCK8法可以做6天左右的生长曲线，1-6天每天收取细胞样本检测。也可以类似MTT法，在相同时间比较不同处理组。
· EdU法
EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖过程中代替胸腺嘧啶插入正在复制的DNA中。EdU与荧光染料可以特异性地反应检测DNA的复制。
细胞克隆形成
细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等的重要技术方法。当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测，细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。
细胞迁移
· Transwell检测
细胞迁移是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。
Transwell的基本原理是将transwell小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，上室内添加上层培养液，下室内添加下层培养液。将细胞种在上室内，由于膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
细胞侵袭
· Transwell检测
细胞侵袭是指细胞向局部侵犯，细胞侵袭实验可用来研究细胞和胞外基质之间的相互作用。胞外基质不仅为细胞提供了结构支架，同时也包含了许多细胞生存及生长过程中生物功能因子。细胞可以分泌酶，用于降解胞外基质中特定的组分，从而使细胞可以在细胞间质中移动。胞外基质胶模仿体内细胞外基质胞外基质环境，包含了支撑细胞结构的最基本的组分。转移性肿瘤细胞由于其高迁移和/或降解胞外基质的酶活从而表现出较强的侵袭性。
铺有Matrigel胶的Transwell小室可用于检测细胞侵袭能力。 Transwell的基本原理是将transwell小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以铺有 Matrigel 胶聚碳酸酯膜相隔，Matrigel是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上，能在DMEM培养基中重建形成膜结构，这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。滤膜孔径一般为8μm，而且膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel的滤膜，这与体内情况较为相似。铺有Martrigel的滤膜放在以细胞小室上下室之间，铺有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趋化剂，上室加入重悬的瘤细胞，具有侵袭能力的细胞在趋化剂诱导下开始穿膜运动。肿瘤细胞穿过重建基质膜的能力与它的体内侵袭转移能力表现出较好的相关性，可以用重建基质膜模型初筛抗侵袭药物。
细胞凋亡
· Annexin V-PI双染色流式检测
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。AnnexinV是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸（PS）有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞的胞膜结合。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，通过流式细胞仪检测可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
细胞周期
· PI( 碘化丙啶）染色
细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即 DNA 合成前期 ( G1 期 )、DNA 合成期 ( S 期 ) 与 DNA 合成后期 ( G2 期 )。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能 ( G0 期 )。由于细胞周期各时相的 DNA 含量不同，通常正常细胞的 G1 / G0 期具有二倍体细胞的 DNA 含量 ( 2N )，而 G2 / M 期具有四倍体细胞的 DNA 含量 (4N)，而 S 期的 DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与 DNA 结合，其荧光强度直接反映了细胞内 DNA含量。因此，通过流式细胞仪 PI 染色法对细胞内 DNA 含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为 G1 / G0期，S 期和 G2 / M期，获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。
细胞分泌物检测
单核细胞、免疫细胞等的TNF和IL定量测定（采用ELISA方法进行检测），在与炎症相关的药物筛选研发中运用的相当广泛。
细胞基因、蛋白水平检测
qPCR、ddPCR、Western Blot（digital Western Blot）等。
CRISPR/Cas9基因修饰
基因敲除：基因上产生DSB，在非同源末端连接修复过程中会产生DNA的插入或删除，从而造成移码突变。
突变引入：用含有特异突变的同源模板，位点产生DSB提高重组效率，从而实现特异突变的引入。
定点转基因：同源模板中加入转基因，在DSB修复过程中拷贝至基因组中，从而实现定点转基因。
常见问题
细胞功能研究平台--样本准备
客户细胞样本
1、进行传代培养的细胞，需告知细胞名称、培养条件等信息。
2、客户提供的可直接进行实验的细胞，需保证细胞质量，如没有细菌、真菌、支原体等感染；并保证细胞的生长状态，细胞状态以我公司技术人员收到细胞后的观察状态为准；具体实验所需的细胞量可根据实验咨询技术人员；流式检测样品需提供荧光信息。
3、寄送冻存细胞需用液氮或者干冰保存运输。
4、寄送培养细胞需装满培养基，拧紧培养瓶盖，封好封口膜，常温运输，严禁冰冻。
客户提供实验中的相关试剂
1、提供厂家货号、保质期、保存条件等信息。
2、客户配制的试剂需提供名称、浓度、安全性、保存条件等信息。
3、请告知具体的实验方案中涉及的实验试剂的具体用量与用法。
客户提供组织或血液进行细胞分离：
1、组织分离需提前告知，并预约时间。
2、组织样本只能在4℃条件保存或运输，有条件可以加入组织保存液、严禁冰冻。
3、需提供足够的组织量。
4、分离方法及要求需提供说明。
5、血液样本需用抗凝管保存。
6、提供的血样或者组织需提供来源说明（特别是病人组织，暂不能接受具传染性的样本）。
细胞功能研究平台--常见问题
Q：需要提供细胞功能实验的具体实验步骤吗？
A：如是细胞毒性实验，Transwell实验等常规实验，不需要提供具体实验步骤；如涉及特殊的实验，或者常规实验中实验条件有特殊要求的，则需要提供具体实验步骤。
Q：购买细胞收到后如何处理？
A：常温运输的细胞：通常是复苏后生长至对数期的细胞。首先观察包装是否完好，瓶口是否漏液，然后显微镜拍摄40x、100x、200x不同倍数的照片各两张。放入培养箱稳定两小时后方可进行其他操作。贴壁细胞把培养基全部吸去，加入10mL新的完全培养基；悬浮细胞离心后把培养基全部吸去，用10mL完全培养基重悬细胞。
低温运输的细胞：通常是用干冰寄送的冻存细胞。客户收到细胞后，观察干冰是否挥发，细胞是否溶解。若无其他问题，推荐当天复苏，亦可直接放入液氮罐保存（长时间），或者超低温冰箱（不超过一周）。收到细胞复苏后如细胞状态不佳或培养中遇到问题，需当天尽快联系我方，并拍摄40x、100x、200x不同倍数的图片，以便售后处理。7天内反馈细胞本身问题免费重发，如操作原因导致可根据实际情况酌情处理；7天内未接到任何反馈视为合格，不予免费售后。
Q：细胞株转染时的瞬转和稳转区别是什么？
A： 瞬转即瞬时转染，是指将外源质粒通过某种方式导入到细胞内得以表达；
稳转即病毒感染，是利用慢病毒将外源插入整合到宿主细胞的基因组，从而达到持久性表达。稳转是基因组整合到宿主细胞基因组，跟随细胞一起增值得以稳定遗传；瞬转是质粒游离在细胞内，一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，但不能稳定遗传。
Q：所有的细胞株都可以构建稳转细胞系吗？
A：不是所有的细胞株都能构建成为稳定细胞系的。构建稳定细胞系需要满足2个条件：1、细胞能稳定传代；2、细胞的转染效率满足要求。
Q：构建稳转细胞株需要的时间以及检测报告包含那些内容？
A：一般稳转采用慢病毒方法，多克隆细胞株需要1个月到1个半月，单克隆细胞株需要2-3个月时间。检测报告包含细胞株构建实验报告、目的基因qPCR检测报告、含有荧光标签的细胞提供细胞荧光照片。如果需要提供Western Blot检测服务，需客户提供一抗并收取额外费用。
细胞功能研究平台--案例分析
案例分析（一）
Chebulic Acid（CA）对Methylglyoxal（MG）诱导的INS-1胰腺β细胞线粒体功能障碍的保护作用
· 研究思路
原文：Chebulic Acid Prevents Methylglyoxal-Induced Mitochondrial Dysfunction in INS-1 Pancreatic β-Cells. Antioxidants (Basel). 2020 Aug 20;9(9):771. doi: 10.3390/antiox9090771.
案例分析（二）
MCL-1合成增加会通过调节ROS/AKT环促进鼻咽癌放射抗性，在世界范围内，鼻咽癌是一种罕见的头颈部肿瘤， 放射治疗是鼻咽癌最重要的治疗策略。尽管放射治疗是杀死癌细胞的有力工具，但矛盾的是，它也促进了侵袭性表型。 因此，这篇文章在体外模拟鼻咽癌细胞的治疗过程。在暴露于辐射后，鼻咽癌细胞亚群逐渐对辐射产生抵抗力，并显示 出癌症干细胞的特征。辐射诱导的干细胞能力在很大程度上取决于抗凋亡髓系细胞白血病1(MCL-1)蛋白的积累。
原文：Increased MCL-1 synthesis promotes irradiation-induced nasopharyngeal carcinoma radioresistance via regulation of the ROS/AKT loop. Cell Death Dis. 2022 Feb 8;13(2):131. doi: 10.1038/s41419-022-04551-z.
公司简介
上海生物芯片有限公司成立于2001年8月，公司由上海科技创业投资（集团）有限公司、上海张江（集团）有限公司、中科院上海有关院所、上海交通大学等在上海的国内知名大学、研究所、医院和企业共同组建而成，经国家发展与改革委员会批准公司建设和运行“生物芯片上海国家工程研究中心”，是我国生物医药领域规模最大的生物技术国家工程研究中心之一，是全国生物样本标准化技术委员会（TC559）、中国医药生物技术协会组织生物样本库分会（BBCMBA）与中国抗癌协会肿瘤样本整合研究分会的秘书处与主任委员单位。
通过二十余年的建设和发展，公司（中心）确立了以生物样本库、基因芯片、高通量测序、蛋白芯片、组织芯片、数字化病理、分子病理与生物信息学为核心平台的技术创新服务体系，以分子医学检测技术和分子诊断产品研发生产为核心竞争力的产业化体系，形成科研和药物研发技术服务、分子诊断产品研发生产销售和分子医学检验三大主营业务，公司（中心）具备科研及公共技术平台服务优势、成熟的科技成果转化服务能力、国家工程研究中心品牌影响力等强大的自身资源及优势。
通过二十余年的建设和发展，公司（中心）确立了以生物样本库、基因芯片、高通量测序、蛋白芯片、组织芯片、数字化病理、分子病理与生物信息学为核心平台的技术创新服务体系，以分子医学检测技术和分子诊断产品研发生产为核心竞争力的产业化体系，形成科研和药物研发技术服务、分子诊断产品研发生产销售和分子医学检验三大主营业务，公司（中心）具备科研及公共技术平台服务优势、成熟的科技成果转化服务能力、国家工程研究中心品牌影响力等强大的自身资源及优势。
售后服务
联系方式
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