细胞技术--稳定株筛选
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细胞技术--稳定株筛选
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414
更新日期：
2024-11-12
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稳定株筛选
研究某个基因的功能最常用的手段是在宿主细胞中过量表达或者通过RNA干扰的方法knock-down该基因,常规手段有瞬时转染和筛选稳定细胞系。
筛选出该基因的过表达或者RNA干扰的稳定细胞系会给您的实验带来极大的便利。有了稳定细胞系,后期的Co-IP或者Pull-Down实验会非常便利;稳定表达重组荧光蛋白的细胞系可以让您动态的观察分子在细胞中的运动。 构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),常用G418来代替新霉素进行选择性筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
筛选稳定细胞系的方法
1)转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系
2)慢病毒感染筛选稳定细胞系
慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达,因此,慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株。
公司简介
聚焦于医学科学基础研究与转化医学的研究，服务于国内以及国外科研人员， 为疾病的诊断、预防、治疗提供研究基础。通过基础研究累积了大量经验，我们逐年增加研发费用，为基础研究提供可靠的产品。 经过10余年的发展，我们与国内超过百余家的研究机构 上千名研究人员共同完成了12000+的实验项目。我们自行建设了实验动物平台，细胞生物学平台，分子生物学平台，蛋白免疫平台，病理平台，以及快速检测平台。我们有超过6000平方米的研究中心，能够承载更多更广泛的医学研究工作。
实验热线：19931682702（同微信）
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