分子与细胞

生物制药N端测序服务

基本信息
服务名称:
生物制药N端测序服务
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271
更新日期:
2023-11-16
服务类别:

服务详情

Edman降解(埃德曼降解)法,是由菲尔•埃德曼(Pehr Edman)首先创立用于肽链或蛋白质中N-端氨基酸序列分析的方法。Edman降解法检测的原理非常简单,在碱性条件下反应,用异硫氰酸苯酯(Phenylisothiocyanate, PITC)与待检测的蛋白质(多肽)的N-端氨基生成苯氨基硫甲酰(PTC)的衍生物,然后处理-关环-选择性切断肽链N-端,得到N-端氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接着用有机溶剂萃取衍生物,在酸的作用下,不稳定的衍生物转变为稳定的的乙内苯酰硫脲(PTH)衍生物,余下肽链中的酰胺键不受影响。通过用HPLC或电泳法分析生成的乙内酰苯硫脲氨基酸(PTH-氨基酸),可以鉴定出氨基酸类别。重复氨基酸鉴定反应可以达到对N端氨基酸按照从N端到C端的方向依次对氨基酸序列进行分析。对于序列较长的蛋白质(多肽),还可以将样品先切成小的肽段,先对肽段序列分析,再将肽段信息进行拼接即可获得完整蛋白质的序列信息。

蛋白质N端测序流程

Edman降解法用于N端测序的优点:

1. PITC与所有氨基酸残基的反应产率和回收率高,因此副产物少,可通过色谱进行准确鉴定;
2. 反应时间快,对于大多数氨基酸残基来说,30min耦合时间,5min切割反应时间即可;
3. 反应后的肽链仍然是完整的,可用Edman降解法重复测定新生的N末端氨基酸。

Edman降解法用于N端测序需要注意的问题:

1. 样品纯度需>90%,盐离子含量在50 mmol/L之内,不含SDS等变性剂,N端必须是均一的高纯样品;
2. 10 Pmol 样品可以测定20 aa;
3. 液体样品不能含有蛋白酶,建议尽早测试,防止时间太长容易降解;
4. 转膜样品在转膜前不宜放置太久以防样品扩散,转膜后可密封保存3-6个月,建议使用Coomassie R-250进行染色,电泳缓存液建议使用CAPS buffer;
5. 样品无信号峰是,建议蛋白进行N-端封闭;
6. 建议整个反应过程中尽可能使用高纯buffer。

公司简介
百泰派克生物科技--生物制品表征,多组学生物质谱检测优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测项目验证
专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDAEMA等的法规和指导原则,通过CNAS/ISO9001
双重质量体系认证
,建立了完备的质量体系,数据冷热/异地备份,设备定期计量/期间核查,软件审
计追踪,为客户提供一体化解决方案和技术服务,支持新药研发药物申报注册生产放行
 
1.公司采用ISO9001质量控制体系,专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务;
2.获国家CNAS实验室认可,为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务;
3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、
单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等;
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