分子与细胞

EMSA

基本信息
服务名称：
EMSA
英文名称：
参考报价：
服务商：
武汉恒意赛生物科技有限公司
总点击数：
185
更新日期：
2022-11-15
服务类别：
分子与细胞
服务详情
  • 蛋白提取
按照核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒说明书操作步骤提取核蛋白。
  • 蛋白浓度定量
使用BCA蛋白质浓度测定试剂盒测定样品蛋白浓度。
  • 制胶  （1mm胶，大约5分钟胶会凝）
试剂 浓度6.5％
H2O   ml 6.8
5*TBE   ml 1
40％丙烯酰胺（37.5：1）ml 1.65
50%甘油  ul 500
10％AP   ul 100
TEMED  ul 10
总体积 ml 10
待胶完全凝固后100v预电泳1h，缓冲液用预冷的0.5×TBE。
  • 蛋白与探针反应
试剂名称 体积
10×binding buffer 2ul
1ug/ul poly（dl.dc） 1ul
50％glycerol 1ul
1%NP-40 1ul
100m M Mgcl2 1ul
核蛋白（unit） 阴性对照反应：0
阳性对照反应：1
冷探针竞争反应：1
常规反应：1
DNA(pmol/ul) 阴性对照反应：0 ul
阳性对照反应：0 ul
冷探针竞争反应：1 ul
常规反应：0 ul
BIO-DNA(fmol/ul) 阴性对照反应：1 ul
阳性对照反应：1 ul
冷探针竞争反应：1 ul
常规反应：1 ul
总体积 ddH2O 补足至20ul
混合后室温放置20分钟或以上。
  • 上样
预电泳完后更换预冷的电泳缓冲液，加5ul的5×上样缓冲液到样品混合液中，马上上样电泳。150v 30－45分钟。
  • 电转移
将带正电的尼龙膜放入0.5×TBE中平衡10分钟。待电泳完成后将加有样品的整块胶取下电转。转膜缓冲液为预冷的0.5×TBE。380m A 30分钟。
  • 交联
转膜完成后将膜取出，放在一张干净的滤纸上，做好标记。于紫外交联仪下交联10min。
  • 封闭
用封闭液封闭15分钟。期间放于摇床上轻柔摇晃。
  • 抗体反应
倒掉封闭液。用封闭液将抗体稀释300倍后，与膜完全作用15分钟。期间放于摇床轻柔摇晃。
  • 洗脱
       用1×的洗脱液清洗5分钟4次。
  • 平衡
用平衡液平衡5分钟。
  • ECL发光检测。
1） 滴加新鲜配制的ECL混合溶液到膜的蛋白面侧，暗室中曝光。
2） 根据不同的光强度调整曝光条件，显影、定影。 
  • 结果分析
将胶片进行扫描存档，AlphaEaseFC软件处理系统分析目标带的光密度值。
公司简介
武汉恒意赛生物科技有限公司坐落于武汉光谷国际生物医药产业园，拥有独立的细胞培养室以及SPF级动物房，致力形态病理学、细胞生物学、分子生物学、蛋白免疫学、模式动物等在科研中的推广和应用，专业从事分子、蛋白、细胞领域相关产品的引进和研发。自成立至今，公司团队成员已参与了多个医学生物研究课题和国家自然科学基金、项目。以多年科研立项、评估、科研转化的经验，为广大科研工作者的课题提供专业的服务，并与全国多家企业以及科研机构建立合作关系为每一位科研工作者提供最优质、最高效的实验服务。
售后服务
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