对于外泌体功能研究，一般先要观察到外泌体被受体细胞摄取或到达目的组织和器官后，再检测受体细胞、组织或器官中相应表型指标是否发生变化。因此，外泌体标记和示踪是外泌体功能研究的基础和关键步骤。华盈生物拥有完整的技术平台和丰富的服务经验，可以提供各种外泌体/凋亡小体的标记、体外细胞吞噬/荧光共聚焦和体内小动物成像等外泌体示踪服务。

       目前已发表的外泌体文章中，外泌体大多使用亲脂性染料进行标记，染料原理是亲脂性荧光膜染料将脂肪族的长尾巴插入外泌体的脂质双层中后发出稳定且持久的强荧光信号（以非共价方式嵌入），有助于观察外泌体与受体细胞/组织/器官之间的相互作用，在体内和体外都有较多应用。

       常用的亲脂性染料主要分为两大类，第一类是PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光），第二类是Di系列的亲脂性染料，如DiL（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光）。这些染料可以稳定的与外泌体的膜脂质区结合并发出荧光，可以用于外泌体的功能学研究。

1. 亲脂性染料:PKH-67（绿色荧光）/PKH-26（红色荧光）

      PKH系列染料具有毒性较小，荧光背景低，脂溶性高，能够穿透细胞膜，荧光强而稳定等特点。其中PKH67的体内荧光半衰期为10-12天，相比于PKH-67，PKH-26具有更长的半衰期，由于其荧光稳定性较强，在标记研究周期超过一周时，特别适用于外泌体示踪研究。

2. 亲脂性羰花青染料

       DiL,DiR,DiO,DiD是一系列亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。这些环境敏感性荧光染料在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，其具有消光系数高、极性依赖性、激发态寿命短等特点。如DiR 是一种亲脂性近红外荧光膜染料，可穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。通过两个18-碳链插入到脂膜，在水中微弱荧光，当掺入膜中时具有高荧光和相当好的光稳定性，实现特异性、稳定的膜染色。此外，近红外荧光成像的背景干净，可以避免生物体内在可见光范围内自发荧光造成的背景干扰。

|   外泌体示踪产品

|   外泌体示踪流程      

|   相关文献

[1]. Chen L, Wang Y, Li S, et al. Exosomes Derived from GDNF-Modified Human Adipose Mesenchymal Stem Cells Ameliorate Peritubular Capillary Loss in Tubulointerstitial Fibrosis by Activating the SIRT1/eNOS Signaling Pathway. Theranostics. 2020 Jul 25;10(20):9425-9442.

[2]. Ren R, Sun H, Ma C, et al. Colon cancer cells secrete exosomes to promote self-proliferation by shortening mitosis duration and activation of STAT3 in a hypoxic environment. Cell Biosci. 2019 Aug 6;9:62.

[3]. Yoshida K, Tsuda M, Matsumoto R, et al. Exosomes containing ErbB2/CRK induce vascular growth in premetastatic niches and promote metastasis of bladder cancer. Cancer Sci. 2019 Jul;110(7):2119-2132.

[4]. Liu Hao,Marquez Rebecca T,Wu Xiaoqing et al. A non-intrusive evaluation method for tumor-targeting characteristics of nanomedicines based on in vivo near-infrared fluorescence imaging. J Mater Chem B, 2019, 7: 4751-4757.

[5]. Tang Yixuan,Wang Xiaoyou,Li Jie et al. Overcoming the Reticuloendothelial System Barrier to Drug Delivery with a "Don't-Eat-Us" Strategy. ACS Nano, 2019, 13: 13015-13026.

[6]. Wiklander O P B, Nordin J Z, O"Loughlin A, et al. Extracellular vesicle in vivo biodistribution is determined by cell source, route of administration and targeting. J Extracell Vesicles. 2015 Apr 20;4:26316.