酵母双杂交
酵母双杂交系统是一种直接在真核细胞内检测蛋白相互作用的方法,具有灵敏度高和特异性好的优点。玉华公司提供多套酵母双杂交系统,
1.Clontech公司基于GAL4转录因子特性建立的一套系统,可用于检测多种蛋白-蛋白间的相互作用,是一种有效的检测方法。
2.Stratagene CytoTrap 双杂交系统可以称作是酵母细胞质双杂交系统,是在Ras 途径的基础上建立的,可对胞质蛋白、膜蛋白、转录因子、inhibitors作为bait蛋白进行酵母双杂交
一、客户提供材料
客户可提供载有诱饵基因的质粒;也可提供基因名称,登录号。
二、诱饵基因载体构建
1) 亚克隆
2) 将诱饵基因构建至BD载体中,测序确保无突变;
3) 检测BD载体中诱饵蛋白的表达,SDS-PAGE电泳及Western-blot检测;检测诱饵蛋白是否有毒性;是否存在自激活现象。
三、文库筛选
1)使用公司具有的筛选文库,或者应客户要求购买文库(有时客户自己提供特制的文库),文库筛选,阳性克隆;
2)抽提质粒,共转化再次验证阳性克隆;
3)排除假阳性,对克隆进行测序及生物信息学分析。
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