重组腺病毒技术服务
服务详情
务内容：
1、携带目的基因的重组腺病毒的制备；
2、携带多个目的基因的重组腺病毒的制备；
3、携带报告基因的重组腺病毒的制备（本公司提供携带绿色荧光蛋白基因和荧光素酶Luc＋基因的重组腺病毒，还可根据客户需要进行制备）；
4、携带干涉序列的重组腺病毒的制备；
具体操作：
1、目的基因的获取：
（1）特定细胞表达的目的基因：提取RNA后进行反转录，PCR扩增；
（2）载体中含有的目的基因：酶切或PCR获取；
（3）融合蛋白基因：根据需求，进行PCR合成目的基因；
2、穿梭质粒的构建：
（1）携带目的基因的穿梭质粒的构建：通过酶切、连接的方式得到，一般采用的是pShuttle-cmv载体；
（2）携带多个目的基因的穿梭质粒的构建：如同时表达两个目的基因，可通过IRES将两个目的基因相连；
（3）携带干涉序列shRNA的穿梭质粒：首先将H1启动子构建到pShuttle质粒上，然后将目的基因克隆到H1启动子下游；
3、重组腺病毒质粒构建：
携带目的基因的穿梭质粒线性化后与Adeasy-1共转BJ5183感受态细胞（电转），筛选得到重组腺病毒质粒，并经PacI酶切鉴定：可见目的质粒出现两条条带，分别为3.0kb或4.5kb和>23Kb两条条带。 将得到的重组腺病毒质粒转染DH5a感受态细胞，以便于保存。
4、重组腺病毒的制备：
将PacI酶切线性化的高纯度高浓度重组腺病毒质粒，以脂质体介导的方式转染293细胞，7～10天出现噬斑，待完全病变后，收集细胞和上清，于-70℃保存。
5、重组腺病毒的鉴定
在基因水平，提取腺病毒基因组DNA，采用目的基因的引物，PCR扩增病毒基因组DNA；并采用相应的引物，检测是否含有复制型腺病毒。
在蛋白水平，分泌蛋白，采用ELISA检测目的基因的表达；膜蛋白采用流式方法进行检测；其他蛋白采用Western-blot方法进行检测。
6、病毒扩增及纯化：
根据实验的需要扩增重组腺病毒（细胞实验20～40皿；动物实验60～80皿），并采用氯化铯密度梯度离心法进行纯化，纯化得到的病毒用10％甘油保存。
7、病毒滴度测定：
紫外分光光度法检测病毒的OD260和280值：根据OD260nm可推算病毒的颗粒滴度； OD260nm/OD280nm代表病毒的纯度。
同时，采用快速CPE和TCID50测定病毒的感染滴度。
服务承诺：
1、从得到cDNA到完成纯化的时间在60个工作日之内；
2、得到的纯化病毒纯度（OD260nm/OD280nm）在1.2~1.4之间，总量大于1×1010pfu；
3、提供详细的实验报告和重要的中间产物（重组腺病毒质粒和原始病毒）；
客户须知：
1、客户如需要进行蛋白水平的鉴定，另行商议实验周期；
2、实验周期不包含TCID50检测时间，一般需要10个工作日。
服务价格：
询价。
公司简介
公司主要经营产品
1抗体：Abcam Abnova Santa cruz PeproTech eBioscience CaymanR&D Cell Signaling Technology(CST) Zymed Laboratories Chemicon Novus Merck Pierce BD BioLegend BioVision Dynal Biotech ASA MABTech KPL Elisa另外，还经营abnova、Ambion、Biocat、Boston Biochem、Covance、Echelon、hycult、 biotechnology 、Invitrogen、invivogen、Jackson、Labvision/NeoMarkers、lifeSpan、MBL、novus、protein等检测试剂盒
2蛋白产品：蛋白抽提、定量、超滤浓缩管、蛋白marker、PVDF膜、硝酸纤维素膜、N尼龙膜、X光胶片、暗盒、增感屏、定显液（粉）、底物显色发光试剂盒、二抗
3常用生化试剂：Sigma、Merck、Amresco、Roche、Oxoid 、GE原装分装，胰蛋白胨、酵母粉、琼脂糖、苷氨酸、谷胱甘肽、氨基酸、生物缓冲液、分离剂试、培养基、蛋白质 酶和辅酶、核酸及其衍生物、碳水化合物、抗生素、维生素染色剂
4耗材：Axygen、Corning、Millipore、NUNC、NEST，细胞培养板（皿）瓶、PCR 薄壁管、8联排平鼓盖、无菌枪头、离心管、细胞程序冻存盒、电极杯、酶标板、CO2培养箱、倒置显微镜、超净台等科研仪器
5血清：gibco、hyclone、PAA、TBD进口原装胎牛血清、新生牛血清、马血清、DMEM、F12、a-MEM、MEM原装进口液体培养基、粉剂培养基、YNB培养基
售后服务
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