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Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体包装服务

基本信息
服务名称:
Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体包装服务
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总点击数:
6505
更新日期:
2009-12-08
服务类别:

服务详情

Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体包装服务
        Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体应用广泛,由于其独特的优势目前已经发展成最有前景的病毒载体之一。根据HSV-1的嗜神经性且对神经细胞无任何伤害,能长期潜伏于神经元细胞中,通过LAT区潜伏表达,HSV-1载体已经成为神经系统中最有效的基因表达载体,在国外已被广泛应用于神经系统疾病(帕金森、阿尔茨海默、慢性疼痛等)的基础研究和药物开发上;根据HSV-1载体对DC细胞的高转染率并能同时装载多个抗原基因,HSV-1载体作为基因疫苗前景非常广阔;由于HSV-1具有广泛的溶瘤谱,HSV-1载体是基因治疗药物的最佳候选之一,能携带多个治疗基因;此外由于HSV-1载体的广泛侵染性和高转导率,其在RNA干扰研究中正发挥越来越重要的作用。

实验流程
 
      Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体质粒及构建:HSV-1载体质粒均为诺赛公司根据HSV-1病毒DNA序列及同源重组原理构建,包装目的基因步骤如下:

Ø    分析所使用的HSV-1载体质粒(神经系统应用中HSV-1载体质粒使用pNX01/CMV质粒,免疫系统应用中HSV-1载体质粒pB205/CMV质粒,RNA干扰应用中使用pNX01/U6质粒)的结构和多克隆位点,选定目的基因克隆所需的酶切位点;

Ø    使目的基因两端的位点与克隆位点适配;

Ø    将目的基因插入于HSV-1载体质粒的多克隆位点中;

Ø     酶切鉴定,必要时测序。

Ø    对构建和鉴定正确的质粒进行大提制备,检测质粒的OD260/280比值和浓度。

Ø    将载体质粒同HSV-1改构后的载体NX01基因组DNA共转染补偿细胞系,获得阳性NX01载体。

Ø    PCR鉴定阳性病毒载体,确认目的基因正确包装到NX01载体中

Ø    扩大培养病毒、收获、凝胶柱纯化、获得高滴度,非复制并带有目的基因的NX01载体

我们的服务

Ø    诺赛依托HSV-1载体技术平台,能为客户提供HSV-1载体的基因包装、纯化、生产以及质量检定等一系列服务,为基础科学研究、药物临床前研究和临床研究提供高滴度和高纯度的HSV-1载体。

Ø    诺赛为实验室研究者提供可用于细胞和动物实验的研究级HSV-1载体的目的基因包装构建和制备服务,客户经8-10周就可获得纯化后浓度为1×108pfu/ml的含目的基因HSV-1载体。诺赛同时为药物开发公司或机构提供临床级HSV-1载体的生产和报检服务,在GMP条件下为客户生产可以用于临床前研究(包括安全性和有效性试验等)、药品报检和临床研究的HSV-1载体制品和技术资料。

Ø    诺赛提供的HSV-1载体包装服务的最小包装规格为200µl、1×10^8pfu/ml,一般能满足实验室研究水平的体外培养实验和动物预实验之用,根据客户的需求,公司也可以提供大包装、更高滴度的产品。HSV-1载体使用方法简单,易操作,不需要辅助病毒和复杂的实验准备工作,客户收到产品后即可立即开展实验。以HSV-1载体在神经系统的应用为例,体外培养时更换培养基后直接加入HSV-1载体至MOI为1.0,对神经元细胞的转染率一般在80%以上,8小时后即开始表达包装入的目的基因。立体定向注射HSV-1载体至大鼠神经系统,注射5µl,12小时后即有目的基因表达,可持续观察6周以上。 

 

已构建产品

Ø    携带标记基因的HSV-1载体:NX01-GFP/RFP(用于神经系统的双荧光标记载体),NX01-GFP(用于神经系统),NX01-LacZ(用于神经系统)

Ø    携带针对GFP基因的双干扰片断HSV-1载体:NX01-U6/H1-GFPi

Ø    携带功能基因的HSV-1载体:rNT3,rBDNF,rCNTF,hNGF,survivin,hNT4,hVEFGA.

公司简介

北京诺赛基因组研究中心有限公司(诺赛基因)是基于基因组学研究的生物高科技企业,公司的发展目标是实现最新生物医药研究成果的产业化。诺赛基因致力于自有知识产权的创新药物的开发,生物标志的鉴定与疾病诊断/预警检测技术的研发,生物制品与试剂的生产,中国人群遗传资源和临床资源的收集、保护、利用与开发,以及生物科技领域相关技术的培训、咨询和服务。

1998年9月,北京诺赛基因组研究中心有限公司由北京生物技术和新医药产业促进中心和北京博大科技投资开发有限公司投资,中国医学科学院/中国协和医科大学、北京大学、中国科学院、军事医学科学院等单位参与组建成立。

诺赛基因开展与人类疾病相关的基因组学、功能基因组学和蛋白质组学研究。1998年10月,国家科技部批准在诺赛基因的基础上成立国家人类基因组北方研究中心,作为国家级研究基地。

诺赛基因自成立以来,整合以北京为中心的科研院所以及临床医院在基因组学及相关领域的科研力量,建立了具有世界级水平的生物学研究实验室,组建了包括8位院士在内的、由26位生物和医药领域资深科学家组成的智囊团,组织并培养了一支由近百名科技人员组成的具有丰富研发经验的科研团队。

诺赛基因现已成功完成和正在进行863、973等国家重点课题及合作项目74项,参与并完成了1%国际人类基因组测序项目,承担了致病微生物基因组测序、中国人群单核苷酸多态性(SNP)检测及疾病基因组学研究等多项国家科研项目。截止目前,诺赛基因已申请专利28族。
 


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