microRNA简介
microRNA（miRNA）是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA,是发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNAs也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个miRNAs的组合来精细调控某个基因的表达。随着miRNA调控基因表达的研究的逐步深入，将帮助我们理解高等真核生物的基因组的复杂性和复杂的基因表达调控网络。
叶民生物为您提供microRNA载体构建技术服务，您只需提供您要做的目的基因序列及ID号，本公司专业的技术人员为您完成microRNA靶位点序列设计分析、及microRNA载体构建；

microRNA载体构建的特点及优点：
1. 超过70%成功阻断：利用BLOCK-It RNAi Designer设计软件，可快速高效地设计、克隆出双链寡核苷酸序列，构建出含Pol II启动子启动的用于RNAi分析的载体，用于RNAi分析，100%保证提供不少于70%的有效阻断（当以50nM转染，而且转染效率至少达80%时，一套中3条RNAi中至少有2条达到至少70%转录的阻断）；
2. 简单的表达跟踪：可通过同-顺反子表达Emerald Green Fluorescent Protein(EmGFP)和目的microRNA (miRNA)使得分析简单以及报告因子活性与阻断之间可靠的相关性
3. 多靶标阻断：同-顺反子（Co-cistronic）表达使得多个靶标同时阻断并且产生综合表现型。
4. 组织特异实验选择：通过选择广泛的目的载体或者Multisite Gateway应用，你可以加入你选择的启动子进行细胞内应用或者体内阻断，在哺乳动物细胞中可进行瞬时或永久的microRNA表达；

microRNA载体构建技术服务流程：
1.microRNA靶点的预测
利用软件得到的目的microRNA的预测靶点。
2.获得microRNA对应DNA模板
根据提供的靶序列，合成两条互补的单链DNA模板。或者，设计引物PCR扩增microRNA靶基因3’UTR序列。
3.microRNA靶序列克隆
将合成的两条单链退火成双链（具有粘性末端），或将PCR产物双酶切，后连入经过同样双酶切的miR-reporter载体中，连接产物转化大肠杆菌。
4.阳性克隆鉴定。
挑选转化的菌落，PCR筛选含有插入片段的阳性克隆，测序验证克隆的序列和目的microRNA靶序列一致。
5.准备质粒，菌株
抽提验证正确的质粒，定量。准备含有正确质粒的单克隆甘油菌株。
6.产品包装，发货
提供有microRNA靶序列的报告质粒，并免费提供阴性对照一份。甘油保存菌株各一支。

 

上海叶民生物技术有限公司成立于2006年8月，是一家致力于为免疫诊断试剂提供高质量抗原抗体等生物活性材料和相关试剂的生物企业。公司以上海交通大学农业与生物学院的相关单位为依托，经营一系列诊断试剂用原料，产品具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、批间差小、单批量大等特点，被国内外多家诊断试剂公司生产采用,并成为其诊断试剂原料长期供应商和合作伙伴. 公司充分利用高校资源和人才、技术等优势,充分利用科研成果，经过几年的不断发展，已经成为国内抗原抗体主要供应商之一。叶民生物将秉着以技术创新带动产业化的发展思路和理念,立足国内并逐步建立起一个涵盖多个领域的生物企业.在此我们真诚的希望能与更多具有优势互补的企事业相关单位及个人合作！