实时荧光定量PCR（Real Time PCR，qRT-PCR）避免了传统PCR 以终产物检测定量
产生的偏差，提高实验的重复性。与常规PCR 相比，实时荧光定量PCR 具有特异
性更强、有效解决PCR 污染问题、自动化程度高等特点，已成为国际公认的核酸分
子定量的标准方法。该技术已被广泛用于检测细胞mRNA 表达量的变化；比较不同
组织的mRNA 表达差异；验证基因芯片，siRNA 干扰的实验结果。它涉及到DNA
或RNA 样品制备，反转录及PCR 反应等一系列重要的分子生物学过程。

配套产品：qPCR实时荧光定量一步法试剂盒  BK2100BK   BK2100  http://www.biomart.cn/infosupply/ff80808125d818cb0125d844868d01a3.htm 

 设计目的片段和内参基因的qPCR 引物：利用Primer5.0 等软件设计PCR 引物
及探针。我们公司免费为客户设计引物和探针。

2 SYBR Green 法：
1）建立以下反应体系
试剂（SYBR Green法） 量
总RNA 根据实验
qPCR mix（包含MLV、Hot-start Taq、dNTP等 ） 终浓度为1×
SYBR Green I solution 终浓度为1×
上游引物，10μM 终浓度：~200 nM
下游引物，10μM 终浓度：~200 nM
MgCl2 根据实验
RNase-Free H2O To 25.0 μl

2） PCR 反应条件如下：
步骤 循环数 步骤温度 时间
逆转录 1 1 42 oC 30 min
失活MLV，激活Taq 1 1 95 oC 10 min
1 95 oC 15 sec
2 X oC* 实时荧光定量PCR 40 30 sec
3 72 oC 30 sec
*与引物的Tm 相关
3） 取5μl PCR 产物跑1.5%琼脂糖凝胶电泳，或做溶解曲线，检测PCR 产物的
特异

                                                                      荧光图谱                                                             

2 Taqman 法
1） 建立以下反应体系
试剂（Taqman法） 量
总RNA 根据实验
qPCR mix（包含MLV，Hot-start Taq、dNTP
等 ）
终浓度为1×
Taqman Probe 根据实验
上游引物，10μM 终浓度：~200 nM
下游引物，10μM 终浓度：~200 nM
MgCl2 根据实验
RNase-Free H2O To 25.0 μl

2） PCR 反应条件如下：
步骤 循环数 步骤温度 时间
逆转录 1 1 42 oC 30 min
失活MLV，激活Taq 1 1 95 oC 10 min
1 95 oC 15 sec
实时荧光定量PCR 40
2 60 oC* 1 min
3实验完毕之后，将数据导入到Excel 中进行数据分析。
4.结果分析：
利用ΔΔCt 法，相对定量，将目的基因的表达与看家基因的表达对比，获得沉默
效果。如下图所示：

百奥迈科(Biomics)生物技术有限公司(原“百奥生物技术（南通）有限公司)是由国家级“千人计划”引进人才—朱远源博士率领的海归团队于2006年在南通经济技术开发区创立，注册资本1212万美元，总投资2500万美元。工业用地100亩，其中已建有一期一万平方米的国际标准生物厂房，设有一流的生产研发技术和设备。在目前近100名员工中，专业人员占78%，各团队均由国际一流的科学家及管理人才领军。经过三年多的发展，公司取得了瞩目的成绩，已获得国内外发明专利11项；具备了全国最大规模的生物及化学合成小核酸（siRNA）文库和基因药物靶点筛选的条件；是亚洲领先的核酸干扰（RNAi）药物研发公司，也是全球极少数集小核酸文库合成、药物靶点筛选、小核酸结构修饰、药物传输系统等四大技术平台于一体的小核酸产业化基地之一。

　　公司建有核酸药物研发、生命科学及化学合成等三大研发/生产中心，并在美国西雅图和硅谷设立了“平台对接”的小核酸药物研发中心和销售平台。2009年,百奥迈科投资成立了江苏吉康生物技术有限公司(子公司),将小核酸率先运用到皮肤美容及皮肤病领域，成为国际上首家小核酸健康产品的供应商。

　　目前公司已经形成以科研试剂和技术外包服务为短线产品、以祛斑美白小核酸特效皮肤系列产品为中线产品以及以第三代生物制药及核酸药物研发、生产和销售为长线产品的商务模式，其中正在研发的治疗老年黄斑变性（AMD）、肝癌、乙型肝炎等疾病的多项小核酸药物均已达到国际前沿水平，某些方面已取得突破性进展，达到国际先进水平并填补了同行业空白。百奥迈科将专注于开发具有自主知识产权的小核酸产品药物，致力于解决人类疑难杂症，造福人类卫生健康事业。

　　公司还利用独有的专利技术和相关技术平台先后与澳大利亚本尼特（Benitec）公司和以色列Zetiq技术公司等进行了药物研发及诊断试剂的国际合作。