测序/合成

DNA 合成

基本信息
服务名称:
DNA 合成
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3577
更新日期:
2016-04-01
服务类别:

服务详情

服务特色          A1  DNA合成                A2   随机引物

1. 世界上最大的化学合成DNA专业公司之一,实力雄厚。现有十多台高通量DNA合成仪,日产引物达10000条。

2. 完善的销售网络,在全国拥有30多处办事处和10多个代理公司,在全球设有40多个国际代理商。

3. 拥有世界范围的市场,合成的引物大量销往美国、加拿大、欧洲、日本以及东南亚地区。

4. 在北京设有DNA合成分部,使北京的用户可以更快的拿到产品。

5. 严格的质量控制,基本合成级DNA和修饰DNA全部采用质谱与电泳双重QC,2003起每年通过ISO 9001 国际质量体系认证。

6. 市场占有率高,占有全国DNA化学合成市场的70%以上。

7. 品种齐全,除各类修饰碱基、普通引物外,还有HPLC、PAGE和HAP纯化以及SiRNA 合成.

 (一)、DNA 合成简介

(二)、不同纯化方法的应用

(三)、 HAP方法纯化oligo DNA

(四)、 PCR产物测序引物DNA错误的原因

 (一)、DNA 合成简介

    目前,oligo DNA合成一般都采用固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段,此方法具有高效、快速偶联等优点,已在DNA化学合成中广泛使用。DNA化学合成不同于酶促的DNA合成过程从5’?3’方向延伸,而是由3’端开始。具体的反应步骤如下:

    1、 保护基 (Deblocking)
      用三氯乙酸 (Trichloroacetic Acid,TCA) 脱去连结在CPG (Controlled Pore Glass) 上的核苷酸的保护基团DMT (二甲氧基三苯甲基),获得游离的5’-羟基端,以供下一步缩合反应。
    2、活化 (Activation)
      将亚磷酰胺保护的核苷酸单体与四氮唑活化剂混合并进入合成柱,形成亚磷酰胺四唑活性中间体 (其3’-端已被活化,但5’-端仍受DMT保护),此中间体将与GPG上的已脱保护基的核苷酸发生缩合反应。
    3、连接 (Coupling)
      亚磷酰胺四唑活性中间体遇到CPG上已脱保护基的核苷酸时,将与其5’-羟基发生亲合反应,缩合并脱去四唑,此时合成的寡核苷酸链向前延长一个碱基。
    4、封闭 (Capping)
       缩合反应后,为了防止连在CPG上的未参与反应的5’-羟基在随后的循环反应中被延伸,常通过乙酰化来封闭此端羟基,一般乙酰化试剂是用乙酸酐和N-甲基咪唑等混合形成的。
    5、氧化 (Oxidation)
       缩合反应时核苷酸单体是通过亚磷酯键与连在CPG上的寡核苷酸连接,而亚磷酯键不稳定,易被酸、碱水解,此时常用碘的四氢呋喃溶液将亚磷酰转化为磷酸三酯,得到稳定的寡核苷酸。

经过以上五个步骤后,一个脱氧核苷酸就被连到CPG的核苷酸上,同样再用三氯乙酸脱去新连上的脱氧核苷酸5’-羟基上的保护基团DMT后,重复以上的活化、连接、封闭、氧化过程即可得到DNA片段粗品。最后对其进行切割、脱保护基 (一般对A、C碱基采用苯甲酰基保护;G碱基用异丁酰基保护;T碱基不必保护;亚磷酸用腈乙基保护)、纯化 (常用的有HAP,PAGE,HPLC,C18,OPC等方法)、定量等合成后处理即可得到符合实验要求的寡核苷酸片段。HAP方法为本公司专利,它集中了所有纯化方法的优点,具有多快好省的特点。
固相合成Oligo DNA是在DNA合成仪上进行的。上述方法合成的Oligo在脱去保护基后,目的Oligo纯度是极低的,其中含有大量的杂质。主要杂质有:所脱下的保护基与氨形成的苯甲酸氨和异丁酸氨,腈磷基上脱下的腈乙基,以及合成时产生的短链等。以至于粗产

公司简介

生工生物工程(上海)股份有限公司成立于1995年,简称上海生工或Sangon, 是外商独资的高新技术企业,经过十年的努力已迅速成为集科研和生产为一体的专业化生物工程公司。特别是化学合成DNA这一产品已使上海生工成为世界知名公司。2003年,生工投资五千万元在松江高科技工业园区建造了七万平方米的生产工业产业基地,2007年全面投入使用。

公司产品涵盖DNA合成、DNA测序、全基因合成、多肽合成、各种生化试剂、各种酶类、分子生物学试剂盒、培养基、自产实验室耗材、小型仪器等。此外、上海生工还代理了IDT 、AMRESCO、BBI、Worthington、MBI、Bioworld、Calendon等国外各类知名公司的产品。

为了不断提升产品的竟争力,上海生工设立生物工程研究所,并出台了一系列鼓励员工积极参与发明创造的政策,每年投入上百万的资金用于产品的质检与研发。2003年通过摩迪国际论证公司的审核,上海生工质量管理体系符合ISO9001(2000)标准之要求。此论证结果为国际认可论坛(IAF)质量管理体系认证多边承认协议MLA成员认可。2003年,本公司还认定并通过一项上海市高新技术项目,两个国家专利的论证及上海市先进企业。

上海生工积极开拓国内外市场,已在国内设立了26个办事处与10个代理公司。通过国外40个代理机构的努力,各类产品冲出国门,源源不断销往世界各地。上海生工拥有5幢实验大楼和总面积7万平米的土地。上海生工能自己生产七大类产品,其中DNA合成和基因合成已成为世界供货中心。

上海生工将进一步加强人才经营、产品经营,不断提升企业的核心竟争力,实现具有高科技产业体系、知识化创业团队的国际化的公司,服务于生命科学领域,迎接世界经济一体化所带来的机遇与挑战。


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