病毒包装
慢病毒是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构,但也有不同于逆转录病毒的组份和特性,作为基因治疗载体发展起来,最近已用于转基因动物制备。利用慢病毒构建的shRNA/miRNA载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,lentivirus-shRNA/miRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。
1、腺病毒表达
腺病毒系统是很受欢迎的可以在任何哺乳动物细胞中高效瞬时过表达的可靠的基因递送平台。对于难转染的细胞,如原代或非分裂细胞,采用病毒递送外源基因的方式是非常有效的选择。
(1)服务流程
1)构建含有外源基因的腺病毒表达克隆,采用PacI消化纯化质粒使ITRs裸露出来。
2)将腺病毒表达克隆转染293A细胞。收获细胞以制备病毒粗提液。
3)将病毒粗提液感染293A细胞以扩增病毒。确定病毒滴度。
4)将病毒上清加入靶细胞中
5)分析重组目的蛋白的表达
(2)您需要提供
1)含有目标基因的质粒(提供测序图谱)或所要表达的目的基因的名称,序列;
2)所需要的病毒滴度及总量,病毒是否需要纯化
3)若需要检测外源基因的表达,如需要请提供相应的抗体
(3)我们提供
提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的腺病毒储存液,重组后的腺病毒载体质粒
(4)质量保证
如无特殊要求我们将提供至少1ml含108-109病毒的未纯化的病毒液
2、慢病毒表达
慢病毒系统是理想的可以在多种细胞类型(如原代细胞、干细胞和非分裂细胞)中实现可重复的稳定表达的基因表达工具。对于难转染的细胞而言,采用病毒递送外源基因的方式是非常有效的选择。慢病毒通过顺式作用元件将病毒运送到细胞核,并将要表达的基因序列整合到细胞的基因组中。采用慢病毒可以得到持续稳定的高表达。我公司采用慢病毒系统进行高滴度的复制缺陷型慢病毒颗粒的生产,从而可以有效转导几乎所有分裂和非分裂细胞类型。
(1)服务流程
1)含目的基因的慢病毒载体的构建和纯化提取;
2)慢病毒表达载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞;
3)培养48~72h,收集培养上清;
4)病毒的纯化和浓缩(超离和/或超滤);
5)滴度测定、目的基因检定
6)将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞,筛选混合稳定细胞株,并检测靶基因的表达。
(2)您需要提供
1)含有目标基因的质粒(提供测序图谱)或所要表达的目的基因的名称,序列;
2)所需要的病毒滴度及总量,病毒是否需要纯化
3)若需要检测外源基因的表达,如需要请提供相应的抗体
(3)我们提供
提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的慢病毒储存液
(4)质量保证
如无特殊要求我们将提供至少1ml含108-109病毒的未纯化的病毒液
上海赛捷生物技术有限公司(Shanghai Saijie Biotechnology Co.,Ltd)创建于2006年,是由一大批资深专业人士共同创办的新型高科技企业,专注于食品安全及生命科学产品研发、生产及服务,公司将先进的现代企业管理理念与强大的专业技术优势相结合,致力于将赛捷生物打造成中国一流的食品安全检测及生物技术产品研发与服务供应商。
赛捷生物发展的原动力是追求技术卓越和创新,拥有先进的仪器设备,经验丰富的专业技术人员和一流的研发、生产条件。迄今为止赛捷生物的食品安全检测产品涵盖从农畜产品的种植、养殖到食品的加工等多个领域,为食品安全监控工作提供了高效、灵敏、快速的解决方案,成为食品安全检测产品知名的供应商和检测方案提供商。
经过数年发展和积累,赛捷生物现已建立涵盖免疫学、分子遗传学、细胞生物学、蛋白组学、、信号传导和神经生物科学等领域的产品技术平台,为食品安全及生物技术产业研发客户提供全方位、优质、便捷的技术服务。
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