分子与细胞

间充质干细胞如何培养?

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间充质干细胞如何培养?
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更新日期:
2024-08-26
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什么是干细胞?
间充质干细胞是干细胞的一个研究分支。
干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞,它们可以不断地自我更新,并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞。干细胞是机体的起源细胞,是形成人体各种组织器官的始祖细胞。


什么是间充质干细胞?

间充质干细胞存在于多种组织(如骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织等),具有多向分化潜力,非造血干细胞的成体干细胞。这类干细胞具有向多种间充质系列细胞(如成骨、成软骨及成脂肪细胞等)或非间充质系列细胞分化的潜能,并具有独特的细胞因子分泌功能,细胞模型被应用于增殖、移植和分化研究,以及体外的免疫反应的鉴定。

间充质干细胞的特性
1. 细胞具有贴壁依附性


2. 生态系统失衡特异性表面抗原表达-阳性和阴性的标记物


3. 多能分化,在体外可以分化成成骨,脂肪和软骨细胞。

间充质干细胞的用途
1.神经系统
间充质干细胞分泌组作为神经源性生态位调节剂
2.骨骼系统
间充质干细胞用于控制骨关节炎
3.肝脏
间充质干细胞可用于肝脏修复的治疗前景。
4.心脏
间充质干细胞来源的炎性成纤维细胞可介导衰老心脏的间质纤维化。
5. 肺
间充质干细胞来源的微泡在肺疾病中的作用。
6.肾脏
间充质干细胞与慢性肾动脉狭窄。
7.胰腺
使用间充质基质细胞制备替代β细胞
8. 肿瘤免疫治疗
改造间充质干细胞可为消除肿瘤生长提供持续浓度的高效特异性抗体。


间充质干细胞培养实验
试剂:Gibco基础培养基,Gibco胎牛血清,75%酒精
耗材:Nest 50ml离心管,Nest 10ml血清移液管,Nest T225透气盖细胞培养瓶 ,Nest 20μl吸头
设备:离心机,水浴锅,培养箱,移液枪,细胞计数仪,显微镜
准备:将胎牛血清按比例适当加入基础培养基中,配制成完全培养基。

实验步骤:
1. 从-196°C液氮罐取出1支间充质干细胞冻存管。

2. 即刻将冻存管置入37°C水浴锅中匀速摆动,持续一分钟左右,使直到管中只剩下最后一片结晶(注意:不要让水没过产品管)。

3. 用酒精擦拭管口。

4. 取20ml完全培养基加入离心管中,将融化好的细胞悬液加入到完全培养基中并充分混匀。



5. 取20ul混匀好的细胞悬液,用细胞计数仪计数。


6. 细胞悬液在1400rpm,室温条件下,离心5分钟,去上清。


7. 加入10-20ml完全培养基轻轻混匀细胞。

8. 每个T225细胞培养瓶中加入50ml完全培养基。


9. 按10000-15000个细胞/cm2接种细胞,平放摇匀使细胞分布均匀,在显微镜下观察细胞分布状态,放入37°C,5% CO2培养箱中培养。

公司简介

国内领先的生命科学领域耗材制造商
无锡耐思生命科技股份有限公司(以下简称“耐思”)于 2009 年成立,并创立 NEST 品牌,秉持“做高端耗材,创国际知名品牌”的信念,专注于生命科学领域产品的研发与制造。耐思拥有 7500m2 十万级洁净车间,2500m2 万级洁净车间,成熟的生产工艺、先进的机器设备、专业的研发中心、资深的管理团队,是国内领先的医疗器械和生命科学领域耗材制造商。
2020 年,公司正式更名为无锡耐思生命科技股份有限公司。
 
美国分公司成立
随着业务的发展,NEST 产品已远销北美、欧洲、日本、韩国、印度等全球多个国家,为了与海外客户建立深厚的合作关系,并更快地将产品送到海外客户手中, 我们于2003年在美国新泽西州成了了NEST美国分公司。NEST美国是属于无锡耐思生命科技股份有限公司的分支机构,拥有一支具有丰富经验和销售技巧的专业团队,能与客户进行深入的沟通,更好更快地了解客户需求,并给予专业的技术支持。2022年,NEST美国将在亚利桑那州凤凰城开设一个新的48,000英尺的仓库,随着新仓库的落成,将为客户极大的降低了存储与物流成本。
 
引进先进设备,确保品质稳定
耐思为确保质量的稳定,实现“原料采购 - 生产 - 包装 - 灭菌 - 交付”的无缝对接, 2012年投资1.5亿新建了2.7万平米厂房(无尘洁净车间),且引进国际先进电子辐照设备RhodotronTT200(辐照灭菌流程经 ISO13485、ISO11137 质量体系认证),进口符合USP CLASS 6的医用级原材料,按GMP质量管理规范标准化生产,现已取得ISO 9001、ISO 13485、ISO 11137、FDA、CE 认证及医疗器械生产许可证。
2021年NEST新增4500m2十万级洁净车间和1500m2万级洁净车间,用于医疗器械与医药包装耗材的生产。
 
三大类产品——实验室耗材、医疗器械、医药包装耗材
耐思的产品分为三大类:实验室耗材(细胞学类耗材、微生物检测类耗材、分子生物学类耗材、通用耗材类)、医疗器械和医药包装耗材。产品适用于医药、农业、轻化工、食品、环保、生物能源、海洋生物资源、再生医学等生命科学领域,品项多、规格全,满足了客户不同的需求。相比进口耗材,NEST 货期短、品质优、价格低,可大大提高工作效率并降低使用成本。
 
定制服务
无锡耐思生命科技股份有限公司拥有强大的模具设计能力及机床精密加工及塑料成型能力,除常规品的销售,同时向行业提供各种定制服务。
 
发展历程
2009年,成立:创立NEST品牌,从细胞培养类产品开始研发
2010年,市场开拓:参加德国慕尼黑,美国PITTCON,正式开始进军海外市场
2011年,通过ISO 9001认证
2012年,筹建新工厂
2013年,美国耐思成立:新增分子生物学耗材,开始研发细胞工厂
2014年,新车间投入生产,灭菌中心通过ISO 11137认证:投资1.5亿新建2.7万平米厂方,引进比利时RhodotronTT200电子束辐照设备灭菌中心通过ISO11137认证
2015年,灭菌中心正式投入使用
2016年,通过ISO 13485认证:细胞工厂验证完成,正式投放市场
2017年,完善工业类客户产品线:细胞工厂系列、摇瓶系列等产品上市
2018年,优化管理,升级设备,研发医疗器械类产品,为获取医疗器械生产许可证而做准备
2019年,取得医疗器械生产许可证,销量破亿
2020年,无锡耐思生命科技股份有限公司成立,开发新冠防疫物资
2021年,在美国新泽西州新增3300m2仓库和研发基地
2022年,在美国亚利桑那州新增4500m2的仓库,极大的降低了存储与物流成本
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