抢救细胞，来看这几招！
只要抓住这5点，救细胞就是小case~
1.细胞衰老
2.个体差异（查看样本初始检测报告）
细胞自身问题
种子质量很重要
细胞在经过多次传代之后，细胞扩增能力就会下降，可以重新复苏更原始的细胞进行培养。
如果你使用的是冻存的细胞，那就有可能在冻存时该细胞的增殖能力就很弱了，可以通过查看以往的操作记录来判断。
还有一点就是个体差异，可以在培养前通过已知的标准对样本进行筛选，从而减少个体差异带来的影响。
二、外源污染
如果相同来源的其它批次的细胞并没有出现问题，你就要思考一下你是不是“中奖了”。请及时对可疑细胞以及培养使用的试剂进行隔离。
细胞污染原因及解决方法：
| 原因 | 方法 |
| 引来外来细胞导致交叉污染 | 无法解决，有风险 |
| 原虫细小点状物 | 细胞生长状态良好时不影响。 |
| 黑色点状黑胶虫 | 细胞增殖旺盛时自然消失 |
| 难以观察，细胞慢慢死亡 | 支原体清除剂 |
| 丝状物大多是真菌 | 比较难去除 |
细菌污染
细菌是一种原核细胞微生物，其大小以微米(μm)计。
常见的污染细菌有革兰氏阴性菌和大肠杆菌、假单胞菌等，革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。
一旦发生细菌污染较易发现，多数情况下培养液短期内颜色变黄，表明有大量酸性物质产生，出现明显混浊现象；有时静置的培养液液体初看不混浊，但稍加振荡，就有很多混浊物漂起。倒置显微镜下观察，可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮。必要时可取少量培养液涂片染色检查以证实细菌种类；有的培养液改变不明显而又疑有污染，可取出少量培养液用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可取10ml细胞悬液以100rpm离心5min，沉淀中加入无抗生素的培养液2ml，置于37℃培养，24h可得结果。
污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。
解决方案：
(1) 丢弃所有已经污染的细胞和培养基；
(2) 培养环境用新洁尔灭擦拭且UV灭菌24小时；
(3) 培养试剂中加入P/S双抗；
(4) 尽可能使用一次性耗材及成品培养基；
真菌污染
真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在梅雨季节进行细胞培养更易污染。
污染培养细胞的多为烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。
霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。一般肉眼可见，较易被发现，短期内培养液多不混浊，倒置显微镜下可见于细胞之间纵横交错穿行的丝状、管状、及树枝状菌丝，并悬浮飘荡在培养液中。镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。
真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
解决方案：
(1) 丢弃所有已经污染的细胞和培养基；
(2) 培养环境用甲醛熏蒸；
(3) 培养试剂中加入两性霉素B；
(4) 尽可能保持细胞培养环境的干燥；
(5) 注意戴帽子和口罩；
(6) 尽可能使用一次性耗材及成品培养基；
支原体污染
约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。
支原体污染细胞后．培养液可不发生混浊．多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解．因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢．甚至从培养器皿脱落。
解决方案：
(1) 丢弃所有已经污染的细胞和培养基；
(2) 使用支原体清除试剂擦拭培养箱及超净工作台；
(3) 培养试剂中加入支原体清除试剂；
(4) 注意戴帽子和口罩；
(5) 尽可能使用一次性耗材及成品培养基；
黑胶虫污染
黑胶虫可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液不浑浊，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。数量不多的时候对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。
原虫污染
培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。
病毒污染
组织细胞培养过程中，如果没有除去潜在的病毒，就会产生病毒污染。
交叉污染
共用试剂、耗材，同时操作不同的样本，都极易造成交叉污染。交叉污染之 | 王应该属于HeLa细胞了，世界上已有很多细胞都受其污染，致使许多实验宣告无效。
面对以上问题，我们技术员需要注意几个方面，设备的洁净度，试剂的选择与储存，耗材的选择，操作方法。
三、试剂
在细胞培养实验中，如果出现使用同批次试剂培养的细胞大部分都出现问题情况，就需要锁定是否是试剂的问题导致的。
首先我们应该先要检查试剂的规格、效价是否与之前一致，如果有改变则需根据情况修改加入的量；
然后我们要检查试剂的品牌是否与之前一致，如果有更换应验证该品牌是否能适用于这类细胞。
最后我们要检查试剂的有效期是否过期、存放位置是否有问题、是否反复冻融等，以免试剂已因此而失效。
总的来说，就是要选对试剂、买真试剂、验证好试剂、保存好试剂、正确使用试剂。
四、操作
严格按照SOP操作实验，避免不必要的感染。轻吹打；掌握消化时间；及时观察细胞培养情况，合理补换液；增殖缓慢时，控制好补液时间，添加血清，细胞生长因子。
五、耗材
选择合适的一次性使用耗材，避免重复使用，确保培养瓶，培养皿等耗材是否可贴壁培养，选择品牌耗材。
比如.......
国内领先的生命科学领域耗材制造商
无锡耐思生命科技股份有限公司（以下简称“耐思”）于 2009 年成立，并创立 NEST 品牌，秉持“做高端耗材，创国际知名品牌”的信念，专注于生命科学领域产品的研发与制造。耐思拥有 7500m2 十万级洁净车间，2500m2 万级洁净车间，成熟的生产工艺、先进的机器设备、专业的研发中心、资深的管理团队，是国内领先的医疗器械和生命科学领域耗材制造商。
2020 年，公司正式更名为无锡耐思生命科技股份有限公司。
美国分公司成立
随着业务的发展，NEST 产品已远销北美、欧洲、日本、韩国、印度等全球多个国家，为了与海外客户建立深厚的合作关系，并更快地将产品送到海外客户手中， 我们于2003年在美国新泽西州成了了NEST美国分公司。NEST美国是属于无锡耐思生命科技股份有限公司的分支机构，拥有一支具有丰富经验和销售技巧的专业团队，能与客户进行深入的沟通，更好更快地了解客户需求，并给予专业的技术支持。2022年，NEST美国将在亚利桑那州凤凰城开设一个新的48,000英尺的仓库，随着新仓库的落成，将为客户极大的降低了存储与物流成本。
引进先进设备，确保品质稳定
耐思为确保质量的稳定，实现“原料采购 - 生产 - 包装 - 灭菌 - 交付”的无缝对接， 2012年投资1.5亿新建了2.7万平米厂房（无尘洁净车间），且引进国际先进电子辐照设备RhodotronTT200（辐照灭菌流程经 ISO13485、ISO11137 质量体系认证），进口符合USP CLASS 6的医用级原材料，按GMP质量管理规范标准化生产，现已取得ISO 9001、ISO 13485、ISO 11137、FDA、CE 认证及医疗器械生产许可证。
2021年NEST新增4500m2十万级洁净车间和1500m2万级洁净车间，用于医疗器械与医药包装耗材的生产。
三大类产品——实验室耗材、医疗器械、医药包装耗材
耐思的产品分为三大类：实验室耗材（细胞学类耗材、微生物检测类耗材、分子生物学类耗材、通用耗材类）、医疗器械和医药包装耗材。产品适用于医药、农业、轻化工、食品、环保、生物能源、海洋生物资源、再生医学等生命科学领域，品项多、规格全，满足了客户不同的需求。相比进口耗材，NEST 货期短、品质优、价格低，可大大提高工作效率并降低使用成本。
定制服务
无锡耐思生命科技股份有限公司拥有强大的模具设计能力及机床精密加工及塑料成型能力，除常规品的销售，同时向行业提供各种定制服务。
发展历程
2009年，成立：创立NEST品牌，从细胞培养类产品开始研发
2010年，市场开拓：参加德国慕尼黑，美国PITTCON，正式开始进军海外市场
2011年，通过ISO 9001认证
2012年，筹建新工厂
2013年，美国耐思成立：新增分子生物学耗材，开始研发细胞工厂
2014年，新车间投入生产，灭菌中心通过ISO 11137认证：投资1.5亿新建2.7万平米厂方，引进比利时RhodotronTT200电子束辐照设备灭菌中心通过ISO11137认证
2015年，灭菌中心正式投入使用
2016年，通过ISO 13485认证：细胞工厂验证完成，正式投放市场
2017年，完善工业类客户产品线：细胞工厂系列、摇瓶系列等产品上市
2018年，优化管理，升级设备，研发医疗器械类产品，为获取医疗器械生产许可证而做准备
2019年，取得医疗器械生产许可证，销量破亿
2020年，无锡耐思生命科技股份有限公司成立，开发新冠防疫物资
2021年，在美国新泽西州新增3300m2仓库和研发基地
2022年，在美国亚利桑那州新增4500m2的仓库，极大的降低了存储与物流成本
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